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免疫學(xué)技術(shù)專題:染色質(zhì)免疫沉淀芯片(Chip-Chip)

2014-6-3  閱讀(1380)

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該技術(shù)能夠快速在目標(biāo)基因組的染色體中確定特異DNA結(jié)合蛋白的準(zhǔn)確結(jié)合位點(diǎn),ChIP芯片也可以在一個基因組的任何感興趣的區(qū)域內(nèi)尋找染色體的結(jié)構(gòu)改變。

一、ChIP-Chip的用途

(1)在基因組范圍內(nèi)確定基因轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合位點(diǎn)和其他DNA結(jié)合蛋白或蛋白復(fù)合體的DNA結(jié)合位點(diǎn)。

(2)染色體活性狀態(tài)的定量分析。

(3)組蛋白修飾的功能研究。通過用?;蚣谆慕M蛋白的特異抗體和沒有進(jìn)行修飾的組蛋白的特異抗體,可以確定與組蛋白修飾有關(guān)的結(jié)合模式的變化。

(4)聚合酶活性的定量分析。

(5)精煉生物信息方法,用功能數(shù)據(jù)來確定啟動子的位置。

二、具體實(shí)驗(yàn)原理和實(shí)驗(yàn)步驟


染色質(zhì)免疫沉淀芯片流程圖

三、GeneChip-TilingArray技術(shù)簡介

Affymetrix公司于2006年1月24日宣布推出GeneChip(R)人類和鼠源嵌合芯片(TilingA,ray)系列產(chǎn)品。該系列芯片研究范圍大大超出已知編碼蛋白序列,可以對整個人類和小鼠基因組進(jìn)行系統(tǒng)的研究。研究人員可以利用這一芯片對轉(zhuǎn)錄因子和其他蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域進(jìn)行研究。zui近,更有研究人員利用Affymetrix的嵌合芯片在過去認(rèn)為是垃圾DNA的區(qū)域中間找到了許多以前從未發(fā)現(xiàn)過的轉(zhuǎn)錄活性區(qū)域。嵌合芯片(TilingArray)是迄今為止分辨率zui高的基因芯片類型,其探針設(shè)計(jì)幾乎涵蓋了目標(biāo)DNA的全部序列。迄今為止,Affymetrix公司已經(jīng)開發(fā)出了人、小鼠、酵母、線蟲、擬南芥等模式生物的全基因組Tiling芯片,為全基因組規(guī)模上研究目的蛋白與核酸的相互作用提供了強(qiáng)有力的分析工具。GeneChip-TilingArray除了全基因組芯片外,還包括了專門應(yīng)用于ChIP—Chip技術(shù)中的人啟動子和小鼠啟動子兩款芯片,探針設(shè)計(jì)覆蓋了轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)附近10kb的范圍,可針對腫瘤相關(guān)的1 300個基因,覆蓋范圍更是增加到了12.5kb。

1882年,德國細(xì)胞學(xué)家弗萊明公開發(fā)表了細(xì)胞有絲分裂現(xiàn)象的觀察結(jié)果,他的工作也被看作是科學(xué)*zui重要的發(fā)現(xiàn)之一。除了對有絲分裂進(jìn)行描繪以及命名之外,弗萊明還對這一過程中看似起關(guān)鍵作用的物質(zhì)——染色質(zhì)作了標(biāo)記。

目前,它是生物學(xué)兩個zui熱門領(lǐng)域——基因組學(xué)和蛋白組學(xué)研究關(guān)注的焦點(diǎn)。但是,不同之處在于:弗萊明采用的是光學(xué)顯微鏡和裝有少量苯胺染色的玻璃瓶對其進(jìn)行研究,而的基因組階段的染色質(zhì)研究采用的是的技術(shù)——染色質(zhì)免疫沉淀作用測定法(ChIP)。

基因組學(xué)和蛋白組學(xué)都將把染色質(zhì)作為研究對象,但兩個領(lǐng)域采用的方法各異。在基因組學(xué)研究中,研究人員通常從一個蛋白質(zhì)開始研究,采用ChIP去找出與基因組關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)。而蛋白組學(xué)研究采用的是反向方法,先用一個特殊的DNA序列作為尋找蛋白質(zhì)的誘餌;然后用ChIP去證實(shí):那些蛋白質(zhì)就是在體內(nèi)與DNA序列相關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)。

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