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細(xì)胞技術(shù)專題:細(xì)胞生長曲線實(shí)驗(yàn)

2014-4-17  閱讀(1231)

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標(biāo)簽: 細(xì)胞 生長曲線

細(xì)胞生長曲線是測(cè)定細(xì)胞生長數(shù)的常用方法,是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo)。一般細(xì)胞傳代之后,經(jīng)過短暫的懸浮然后貼壁,隨后度過長短不同的潛伏期,即進(jìn)入大量分裂的指數(shù)生長期。為了準(zhǔn)確描述整個(gè)過程中細(xì)胞數(shù)目的動(dòng)態(tài)變化,典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期,斜率較大的指數(shù)生長期,呈平臺(tái)狀的平頂期及退化衰亡4個(gè)部分。

實(shí)驗(yàn)方法

  • 細(xì)胞生長曲線
實(shí)驗(yàn)方法原理細(xì)胞生長曲線是觀察細(xì)胞生長基本規(guī)律的重要方法。只有具備自身穩(wěn)定生長特性的細(xì)胞才適合在觀察細(xì)胞生長變化的實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用。因而在細(xì)胞系細(xì)胞和非建系細(xì)胞生長特性觀察中,生長曲線的測(cè)定是zui為基本的指標(biāo)。細(xì)胞生長曲線的測(cè)定一般可利用細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行。
實(shí)驗(yàn)材料

細(xì)胞

試劑、試劑盒

D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 雙抗 0.08%胰酶

儀器、耗材

凈化工作臺(tái) 離心機(jī) 恒溫水浴箱 冰箱 倒置相差顯微鏡 培養(yǎng)箱 吸管 培養(yǎng)瓶 吸頭 槍頭 24培養(yǎng)板 膠塞 微量加樣槍 紅血球計(jì)數(shù)板

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 取生長狀態(tài)良好的細(xì)胞,采用一般傳代方法進(jìn)行消化,制成細(xì)胞懸液。


2. 計(jì)數(shù),地將細(xì)胞分別接種于21~30個(gè)大小一致的培養(yǎng)瓶內(nèi)或培養(yǎng)孔(以24孔培養(yǎng)板為宜),每瓶或孔細(xì)胞總數(shù)要求一致,加入培養(yǎng)液的量也要一致。


3. 每天或每隔一天取出3瓶(孔)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),計(jì)算均值。培養(yǎng)3~5 d 常要給未計(jì)數(shù)的細(xì)胞換液。


4.  以培養(yǎng)時(shí)間為橫軸,細(xì)胞數(shù)為縱軸(對(duì)數(shù)),描繪在半對(duì)數(shù)座標(biāo)紙上,連接成曲線后即成該細(xì)胞的生長曲線。

展開 
注意事項(xiàng)

1.  細(xì)胞生長曲線雖然zui為常用,但有時(shí)其反映數(shù)值不夠,可有20~30%的誤差,需結(jié)合其它指標(biāo)進(jìn)行分析。


2.  現(xiàn)在很多實(shí)驗(yàn)室利用培養(yǎng)板采用MTT法進(jìn)行生長曲線測(cè)定,較為簡便。


3.  標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞生長曲線近似“S”形,一般在傳代后*天細(xì)胞數(shù)有所減少,再經(jīng)過幾天的潛伏適應(yīng)期,然后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期,達(dá)到平臺(tái)期后生長穩(wěn)定,zui后到達(dá)衰老。


4.  在生長曲線上細(xì)胞數(shù)量增加1倍時(shí)間稱為細(xì)胞倍增時(shí)間,可以從曲線上換算出。

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