久久久久亚洲精品男人的天堂,日本韩国男男作爱GAYWWW,特黄AAAAAAA片免费视频,av天堂电影网

上海北諾生物科技有限公司

中級會員·14年

聯(lián)系電話

15800960770

您現(xiàn)在的位置: 首頁> 技術(shù)文章 > 細(xì)胞技術(shù)專題:大鼠肝星狀細(xì)胞原代培養(yǎng)實驗
中級會員·14年
聯(lián)人:
周經(jīng)理 劉經(jīng)理
話:
021-57730393
機:
15800960770
真:
86-021-61496710
址:
上海市徐匯區(qū)宜山路520號中華門大廈18樓D座
化:
www.bnbiotech.com
網(wǎng)址:
www.bnbiotech.com

掃一掃訪問手機商鋪

細(xì)胞技術(shù)專題:大鼠肝星狀細(xì)胞原代培養(yǎng)實驗

2014-2-25  閱讀(1402)

分享:

標(biāo)簽: 大鼠 肝星狀細(xì)胞 原代培養(yǎng)

大鼠肝星狀細(xì)胞原代培養(yǎng)可以:(1)用于細(xì)胞保種;(2)用于分子生物學(xué)研究;(3)用于基因治療研究。

實驗方法

  • 胰酶消化法
實驗方法原理將小鼠的肝細(xì)胞從機體中取出,經(jīng)胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細(xì)胞,置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖。
實驗材料

SD大鼠

試劑、試劑盒

戊巴比妥鈉 小牛血清 DMEM 酶消化液 D-Hanks' 液 酚紅 臺盼蘭 HBSS 氯化鈉 PBS

儀器、耗材

手術(shù)刀 手術(shù)剪 尼龍網(wǎng) 相差顯微鏡 熒光顯微鏡

實驗步驟

一、實驗材料準(zhǔn)備

1.  動物:雄性SD大鼠(體重250-450 g)。
 

2.   試劑:戊巴比妥鈉,小牛血清(或胎牛血清,則更好),DMEM,酶消化液I、Ⅱ(以HBSS配),18% Nycodenz(以GBSS配),D-Hanks' 液(KCl 0.4 g/L,KH2PO4 0.06 g/L,NaCl 8.0 g/L,NaHCO3 0.35 g/L,Na2HPO4.7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 0.053 g/L,可加酚紅 0.02 g/L),HBSS,臺盼蘭等。
 

3.  器械:手術(shù)器械,200目尼龍網(wǎng),相差顯微鏡,熒光顯微鏡。
 

二、原代培養(yǎng)方法
 

1.  大鼠腹腔麻醉后在超凈臺上剖腹,進(jìn)行門靜脈插管,以D-Hanks'液灌注,同時剪開下腔靜脈,沖掉血液后,改灌以100 ml酶消化液I(0.05% IV型膠原酶)。

2.  待肝臟變軟后,離體肝臟并剪碎,繼續(xù)以酶消化液II(含20 U/ml DNase I的0.05% IV型膠原酶)消化15 min,尼龍網(wǎng)過濾后以450 g 離心5 min(4℃,下同)。

3.  以HBSS重懸沉淀至10 ml,再混以20 ml Nycodenz液,分置于離心管中,并分別覆以2-3 ml HBSS,1450 g離心16 min后取界面細(xì)胞。

4.  以HBSS重懸后再次離心收集細(xì)胞,以DMEM重懸后進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),并判斷存活率和產(chǎn)量,zui后按照常規(guī)方法接種(105細(xì)胞/cm2),次日換液,以后每2-3天換液一次。
 

三、傳代方法

棄去培液后以D-Hanks'液洗兩次,加0.125%胰酶(原代加0.05% EDTA)消化,鏡下觀察細(xì)胞突起回縮(2-5 min左右),以*培液(DMEM+10% NBS)終止反應(yīng)(若不用EDTA,可以不需離心),充分吹打后以1:2-1:3接種,然后繼續(xù)培養(yǎng)(5% CO2,37℃)。
 

四、 結(jié)果

接種次日,光鏡下可見細(xì)胞呈星芒狀,胞質(zhì)內(nèi)有脂滴,熒光鏡下328 nm處見自發(fā)熒光。附上發(fā)表于Biochem Biophys Res Commun 2004年文章的照片(圖1)。

 

 


 

展開 
注意事項

1.  進(jìn)一步鑒別需要做免疫組化:Desmin和α-SMA;后者在細(xì)胞激活后才表達(dá)。

2.  采用無須原位消化的方案,*可行,只不過消化時間更難控制!實驗采用原代培養(yǎng)的或傳代后9代內(nèi)的細(xì)胞(5代以內(nèi))。

展開 
其他一、參考文獻(xiàn)
 

1. 袁桃霞,張錦生,張月娥,等. 大鼠肝Ito細(xì)胞的體外培養(yǎng)及肝素對其抑制作用的觀察. 上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 1996;23(2):90-93.
 

2. Huang GC, Zhang JS, Tang . Involvement of C/EBP-α gene in in vitro activation of rat hepatic slate cells. Biochem Biophys Res Commun 2004;324(4):1309-1318.

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
產(chǎn)品對比 二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機商鋪

對比框

在線留言
国产精品国产三级欧美二区| 国产精品亚洲专区无码影院| 性色午夜视频免费男人的天堂| 义子中出人妻在线中文| 小泽玛利亚在线观看| 欧美精品亚洲自拍| 二三线家庭影院有哪些好的产品| 久草小区二区三区四区网页| 国产一区二区影视| h版加勒比女海盗正在播放| 不卡日韩| 国产精品久久久久久亚洲小说| 性色AV无码免费一区二区三区| 亚洲AV无码成人精品区狼人影院| 荫蒂每天被三个男人添视频| 人妻中文字幕乱人伦在线| 69xx免费观看视频| 亚洲成a人v欧美综合天堂| 日韩经典第一页| 欧美牲交三级欧美做真爱| 五月丁香综合激情在线不卡| 日韩国产在线观看| 国产精品毛片一区二区| 女同一区二区在线观看| 亚洲AV无码一区东京热久久| 国产美女被遭强高潮免费网站| 少妇洁白无删减版178章| 蜜芽亚洲AV无码一区二区三区| 久久精品国产在热亚洲完整版| 一道精品视频一区二区三区男同| avtt亚洲一区中文字幕| 美女写真视频| 手机在线看片日韩欧美| 成人影片麻豆国产影片免费观看| 成人影片麻豆国产影片免费观看| 专干熟肥老妇人视频在线看| 徐文东林伊人| 月光影视免费看完整版| 亚洲va在线va天堂va手机| 欧美日韩国产高清在线视频| 欧美日韩一级视频|