久久久久亚洲精品男人的天堂,日本韩国男男作爱GAYWWW,特黄AAAAAAA片免费视频,av天堂电影网

上海北諾生物科技有限公司

中級(jí)會(huì)員·14年

聯(lián)系電話

15800960770

您現(xiàn)在的位置: 首頁> 技術(shù)文章 > 細(xì)胞技術(shù)專題:大鼠胰島細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
中級(jí)會(huì)員·14年
聯(lián)人:
周經(jīng)理 劉經(jīng)理
話:
021-57730393
機(jī):
15800960770
真:
86-021-61496710
址:
上海市徐匯區(qū)宜山路520號(hào)中華門大廈18樓D座
個(gè)化:
www.bnbiotech.com
網(wǎng)址:
www.bnbiotech.com

掃一掃訪問手機(jī)商鋪

細(xì)胞技術(shù)專題:大鼠胰島細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

2014-2-20  閱讀(1114)

分享:

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

實(shí)驗(yàn)方法原理水合氯醛腹腔麻醉,采用膠原酶ⅴ逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度離心的方法分離、純化大鼠胰島,并分離、培養(yǎng)胰島單細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)材料

一周齡Wistar 大鼠

試劑、試劑盒

D-Hanks’液 胰蛋白酶 Ⅴ型膠原酶 葡萄糖 碘乙酸

儀器、耗材

手術(shù)剪 手術(shù)鉗 眼科剪刀 眼科鑷子 大頭針 手術(shù)刀片 培養(yǎng)皿

實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)步驟


1. 一周齡Wistar大鼠,斷頸處死,于75%乙醇浸泡15 分鐘,無菌取出胰腺,于冰冷無菌D-Hanks’液中漂洗,用眼科剪仔細(xì)清除脂肪、包膜、血管等胰外組織,轉(zhuǎn)入青霉素小瓶中。

 

2. 加入少量無菌D-Hanks’液,用眼科剪剪成0.1-1.0 mm大小的碎片,用滴管輕輕吸出上層細(xì)小脂肪碎塊和油滴,再用無菌D-Hanks’液反復(fù)清洗 8~10 次,加入10 倍體積無菌消化酶液[胰蛋白酶-膠原酶消化液:0.05  g 胰蛋白酶,0.025 g Ⅴ型膠原酶(663 U/mg),0.05 g 葡萄糖,溶于100mL 無Ca2+、Mg2+的0.01 mol/L PBS(pH 值為 7.4)溶液,用0.22 µm 微孔濾膜濾菌],38℃±1℃消化,消化過程中不斷震蕩,10 分鐘后棄去上清液。

 

3. 用無菌D-Hanks’液將組織塊清洗 2~3 次,加入新鮮酶液繼續(xù)消化,重復(fù)上述步驟,此時(shí)組織塊邊緣模糊。

 

4. 將組織塊浸入消化酶液中,38℃±1℃消化10 分鐘,將消化酶液與組織塊分開,組織塊重新加入新鮮消化酶液進(jìn)行消化;而原消化酶液1500  rpm離心 10 分鐘,取沉淀即為消化下的細(xì)胞,重新用無菌D-Hanks’懸浮,離心,重復(fù) 1~2 次,再用培養(yǎng)基洗 2~3 次,用培養(yǎng)基懸浮即得細(xì)胞懸液。

 

5. 將消化過的組織塊重復(fù)消化5~6 次至組織塊消化*,重復(fù)以上操作。

 

6. 合并幾次所得細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞濃度為 2×105個(gè)細(xì)胞/mL,將細(xì)胞懸液接種于24 孔塑料培養(yǎng)板中,每孔1 mL,置于37℃,5%CO2,飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 

7. 由于成纖維細(xì)胞貼壁要比胰島細(xì)胞迅速,接種15 h 后,輕輕振蕩培養(yǎng)板,將上面未貼壁的細(xì)胞接入新的培養(yǎng)板中,可除去部分成纖維細(xì)胞。

 

8. 將新培養(yǎng)板中細(xì)胞培養(yǎng) 48 小時(shí)后,換新鮮配置的含有2.5 ng/mL 的碘乙酸的培養(yǎng)基培養(yǎng)5 h,可除去絕大部分成纖維細(xì)胞,而胰島細(xì)胞不受傷害,換不含碘乙酸的培養(yǎng)基洗2 次,并換不含碘乙酸的培養(yǎng)基在 37℃、5% CO2,飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每隔 3 天換培養(yǎng)液,獲得單層胰島細(xì)胞。

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
產(chǎn)品對(duì)比 二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機(jī)商鋪

對(duì)比框

在線留言
久久精品99久久香蕉国产色戒| 一级视频在线观看免费| 99精品国产久热在线观看蜜桃| 国产第一页屁屁影院| 门卫老李干了校花高小柔| 欧美国产日韩A在线观看| 天美传媒在线| 亚洲AV无码国产剧情| 日本不卡免费高清视频| 老司机免费午夜精品视频| 麻豆白色蕾丝连衣裙| 奇米狠狠一区二区三区| 丰满少妇被猛烈进入| 真实国产精品vr专区| 日韩一区二区在线视频| 国产精品久av福利在线观看| 国内精品久久久久久久97牛牛| 午夜爽爽爽男女免费观看hd| 日本韩国国产欧美在线观看| 日韩高清一区二区三区不卡| 午夜精品国产| 国产精品久久久免费99| 蜜桃成人无码区免费视频网站| 国产玖玖视频| 欧美成人一区在线播放| 激情综合亚洲欧美日韩| 久久99热这里有精品| 久久国产成品亚洲精品影院| 2021国产精品视频网站| 金瓶悔1一5扬思敏免费看| 免费无码又爽又刺激高潮| 91精品国产麻豆| 亚洲AV成人影视综合网| 饥渴老熟妇乱子伦视频| 我们高清日本免费观看| 91蝌蚪九色在线| 国产成人一区二区三区影资源| 国模大胆一区二区三区| 久久久精品国产免大香伊| 亚洲欧洲日产国无高清码图片| 欧美伊人网|