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生物化學(xué)技術(shù)專題:蘆丁的提取及鑒定

2014-1-9  閱讀(1666)

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概述

蘆?。≧utin)廣泛存在于植物界中,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)含蘆丁的植物至少在70種以上,如煙葉、槐花、蕎麥和蒲公英中均含有。尤以槐花米(為植物Sophorajaponica的未開放的花蕾)和蕎麥中含量zui高,可作為大量提取蘆丁的原料。蘆丁是由斛皮素(Quercetin)3位上的羥基與蕓香糖(Rutinose)〔為葡萄糖(Glucose)與鼠李糖(Rhamnose)組成的雙糖〕脫水合成的苷。

 

蘆丁為淺黃色粉末或極細(xì)的針狀結(jié)晶,含有三分子的結(jié)晶水,熔點(diǎn)為174~178℃,無水物188~190℃。溶解度:冷水中為1:10000;熱水中1:200;冷乙醇1:650;熱乙醇1:60;冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、、氯仿、石油醚,溶于堿而呈黃色。

 

 蘆丁具有維生素P樣作用。有助于保持及恢復(fù)毛細(xì)血管的正常彈性,主要用作防治高血壓病的輔助治療劑,亦可用于防治因缺乏蘆丁所致的其他出血癥。


實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?/strong>

1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

    ①通過蘆丁的提取與精制掌握堿-酸法提取黃酮類化合物的原理及操作。

    ②通過蘆丁結(jié)構(gòu)的檢識,了解苷類結(jié)構(gòu)研究的一般程序和方法。

    ③了解UV及NMR在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用。


2.要求

    ①要拿到以下三個(gè)化合物:蘆丁、槲皮素、蘆丁的全乙?;衔?。

    ②能夠拿根據(jù)化學(xué)試驗(yàn)及UV、NMR數(shù)據(jù)初步推斷出蘆丁的結(jié)構(gòu)。并對黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)測定有一般性的了解。


試驗(yàn)方法
1.蘆丁的提取與分離(見下圖)

 2.蘆丁的鑒定

    1)蘆丁的定性反應(yīng)

    取蘆丁3~4mg,加乙醇5~6ml使其溶解,分成三份作下述試驗(yàn):

    A.取上述溶液1~2ml,加2滴濃鹽酸,在酌加少許鎂粉,注意觀察顏色變化情況。

    B.取上述溶液1~2ml,然后滴加2%檸檬酸的甲醇溶液,注意觀察顏色變化情況,在繼續(xù)向試管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液,并詳細(xì)記錄顏色變化情況。

    C.取上述溶液1~2ml,然后再加入10%α-等體積的萘酚乙醇溶液,搖勻,沿管壁滴加濃硫酸,注意觀察兩液面產(chǎn)生的顏色變化。

 

    2)蘆丁的紫外光譜解析

    取蘆丁溶于色譜純甲醇中,加入規(guī)定的試劑,測定其UV光譜,試解析光譜并初步判斷其結(jié)構(gòu)。

 

    3)蘆丁的NMR波譜解析

    A.蘆丁的*基硅醚NMR譜的解析

    B.十乙酰化蘆丁的NMR光譜解析

 

    4)蘆丁水解后糖與苷元的鑒定

    A.水解方法:精密稱取蘆丁1g(±0.01g),加1%硫酸100ml,加熱40min,放冷靜置,過濾。所得沉淀用少許水洗除酸,干燥稱重,計(jì)算苷元與糖的重量比。然后用乙醇(95%大約10ml)進(jìn)行重結(jié)晶,即得苷元。

    B.苷元的鑒定:用紙色譜法與對照品對照。


 

本實(shí)驗(yàn)講解要點(diǎn)及注意事項(xiàng)

    ①蘆丁提取方法,重點(diǎn)介紹堿-酸法的原理及注意事項(xiàng)。

    ②定性實(shí)驗(yàn)的目的、意義及注意事項(xiàng)。

    ③UV及NMR光譜在蘆丁結(jié)構(gòu)檢識中的應(yīng)用。

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