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蛋白質技術專題:血漿游離血紅蛋白測定

2013-12-5  閱讀(1273)

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實驗原理
 
血紅蛋白具有類過氧化物酶活性,可催化H2O2釋放新生態(tài)氧,使鄰甲聯(lián)苯胺氧化發(fā)生顏色變化,由無色zui終變?yōu)樗{紫色。根據(jù)顯色深淺與標準進行比較,可測出其含量。
 
實驗方法
 
材料:
 
1.2g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液
 
2.1%H2O2
 
3.10%醋酸溶液
 
4.分光光度計
 
方法:
 
1.抽取靜脈血2-3ml,枸櫞酸鈉抗凝,離心分離血漿。
 
2.按下表進行操作,用分光光度計,波長為530nm,以空白管調零,測定測定管的吸光度。

 
試劑 (ml)
測定管
空白管
2 g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液
0.5
0.5
患者血漿
0.02
/
1% H2O2
0.5
0.5
混勻后室溫放置10min
10%醋酸溶液
5.0
5.0
室溫放置10min

3.計算公式
 
血漿游離Hb(mg/L)=測定管吸光度/標準管吸光度×100
 
實驗結果計算
 
參考范圍:0-40mg/L
 
注意事項
 
1.一切容器避免血紅蛋白污染;
 
2.采血要順利,器皿要干燥,檢測血漿要新鮮,及時分離,防止人為溶血;
 
3.鄰聯(lián)苯胺溶液具致癌性,檢測時要小心,廢液要妥善處理,以免污染;
 
4.雙氧水要新鮮配置,濃度要準確。

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