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流式細(xì)胞儀的工作原理

2013-6-30　　閱讀(1757)

流式細(xì)胞儀的工作原理

流式細(xì)胞儀主要由四部分組成：流動(dòng)室和液流系統(tǒng)，激光源和光學(xué)系統(tǒng)，光電管和檢測(cè)系統(tǒng)，計(jì)算機(jī)和分析系統(tǒng)。四大系統(tǒng)共同完成信號(hào)的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)換和傳輸任務(wù)。檢測(cè)時(shí)將待測(cè)細(xì)胞或微粒制成細(xì)胞懸液，進(jìn)行熒光染色后加入樣品管中。以一定壓力將待測(cè)樣品壓人流動(dòng)室，在高壓下磷酸緩沖液（鞘液）從鞘液管噴出，鞘液管人口方向與待測(cè)樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動(dòng)，組成一個(gè)圓形流束（鞘流），待測(cè)細(xì)胞在鞘液包繞下單行排列，依次通過檢測(cè)區(qū)。流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦后的光束，垂直照射在樣品流上，當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物通過激光照射區(qū)時(shí)，產(chǎn)生代表細(xì)胞內(nèi)部不同物質(zhì)、不同波長的熒光信號(hào)，這些信號(hào)以細(xì)胞為中心向空間360^o 立體角發(fā)射，產(chǎn)生散射光和熒光信號(hào)。散射光包括前向角散射和側(cè)向角散射。前向角散射與被測(cè)細(xì)胞直徑的平方密切相關(guān)，反映細(xì)胞體積的大小。側(cè)向角散射光對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)及核膜的折射率更為敏感，可提供有關(guān)細(xì)胞內(nèi)精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。經(jīng)熒光染色的細(xì)胞受到適合的光波激發(fā)后產(chǎn)生的熒光通過光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變成電信號(hào)。zui常用的光電轉(zhuǎn)換器是光電倍增管。從光電倍增管輸出的電信號(hào)需要經(jīng)過放大后才能被傳送到計(jì)算機(jī)，經(jīng)模／數(shù)轉(zhuǎn)換器傳輸?shù)轿C(jī)處理器形成數(shù)據(jù)文件，保存在計(jì)算機(jī)上。保存在計(jì)算機(jī)上的數(shù)據(jù)可在脫機(jī)后再進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

細(xì)胞的分選是通過分離含有單細(xì)胞的液滴而實(shí)現(xiàn)的。在流動(dòng)室的噴口上配有一個(gè)超高頻電晶體，充電后振動(dòng)，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測(cè)細(xì)胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的正負(fù)電荷偏轉(zhuǎn)板時(shí)，在高壓電場(chǎng)的作用下偏轉(zhuǎn)，落人各自的收集容器中，不予充電的液滴落人中間的廢液容器，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。

流式細(xì)胞儀結(jié)構(gòu)圖

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