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蛋白質(zhì)的定量測定實驗
蛋白質(zhì)定量是生物化學(xué)、食品檢驗和其它生命學(xué)科zui常涉及的分析內(nèi)容，是臨床診斷的重要指標(biāo)，也是許多生物制品、藥物、食品質(zhì)量檢測的重要指標(biāo)。生化實驗中，在對生化藥品，特別是蛋白質(zhì)、酶、某些多肽或蛋白質(zhì)激素的分離純化時，對蛋白質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確可靠的定量分析是非常重要的。
紫外分光光度法是根據(jù)蛋白質(zhì)的物理性質(zhì)來對蛋白質(zhì)進(jìn)行定量的；而凱氏定氮法、雙縮脲法、Lowry法、BCA法、膠體金法測試根據(jù)蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)來實現(xiàn)對蛋白質(zhì)進(jìn)行定量的；根據(jù)蛋白質(zhì)的染色性質(zhì)的不同，又建立了考馬氏亮藍(lán)染色法和銀染法；此外還有人在這些蛋白質(zhì)定量方法的基礎(chǔ)上建立了熒光法。
紫外分光光度法是根據(jù)蛋白質(zhì)的物理性質(zhì)來對蛋白質(zhì)進(jìn)行定量的；而凱氏定氮法、雙縮脲法、Lowry法、BCA法、膠體金法測試根據(jù)蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)來實現(xiàn)對蛋白質(zhì)進(jìn)行定量的；根據(jù)蛋白質(zhì)的染色性質(zhì)的不同，又建立了考馬氏亮藍(lán)染色法和銀染法；此外還有人在這些蛋白質(zhì)定量方法的基礎(chǔ)上建立了熒光法。
然而蛋白質(zhì)的種類很多，結(jié)構(gòu)不均一，分子量又相差很大，功能各異，這給建立一個理想而又通用的蛋白質(zhì)定量分析的方法帶來了很大的困難。目前測定蛋白質(zhì)含量的方法有很多種，不同的方法各有其特點。
由于每種方法都有其自身的特點和局限性，因而需要在了解各種方法的基礎(chǔ)上根據(jù)不同情況選用恰當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)測定方法，以滿足不同的要求。例如凱氏定氮法結(jié)果zui，但操作復(fù)雜，用于大批量樣品的測試則不太合格；BCA法以其試劑穩(wěn)定，抗干擾能力較強(qiáng)，結(jié)果穩(wěn)定，靈敏度高而受到歡迎；而膠體金法具有較高的靈敏度，可達(dá)到毫微克水平，用于微量蛋白的測定。雙縮脲法操作簡單，線性關(guān)系好，但靈敏度差，樣品需要量大，測量范圍窄，因此在科研上的應(yīng)用受到限制；而酚試劑法彌補(bǔ)了它的缺點，它結(jié)合了雙縮脲法中銅鹽反應(yīng)與Folin-ciocalteau試劑反應(yīng)的特點，因而在科研中被廣泛采用，但是它的干擾因素較多；考馬氏亮蘭染色法因其靈敏而簡便開始重新受到關(guān)注；
附：常用的測定蛋白質(zhì)含量方法的比較
由于每種方法都有其自身的特點和局限性，因而需要在了解各種方法的基礎(chǔ)上根據(jù)不同情況選用恰當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)測定方法，以滿足不同的要求。例如凱氏定氮法結(jié)果zui，但操作復(fù)雜，用于大批量樣品的測試則不太合格；BCA法以其試劑穩(wěn)定，抗干擾能力較強(qiáng)，結(jié)果穩(wěn)定，靈敏度高而受到歡迎；而膠體金法具有較高的靈敏度，可達(dá)到毫微克水平，用于微量蛋白的測定。雙縮脲法操作簡單，線性關(guān)系好，但靈敏度差，樣品需要量大，測量范圍窄，因此在科研上的應(yīng)用受到限制；而酚試劑法彌補(bǔ)了它的缺點，它結(jié)合了雙縮脲法中銅鹽反應(yīng)與Folin-ciocalteau試劑反應(yīng)的特點，因而在科研中被廣泛采用，但是它的干擾因素較多；考馬氏亮蘭染色法因其靈敏而簡便開始重新受到關(guān)注；
附：常用的測定蛋白質(zhì)含量方法的比較
| 方 法 | 測定范圍 （μg/ml） | 不同種類 蛋白的差異 | zui大吸收 波長（nm） | 特 點 |
| 凱氏定氮法 | | 小 | | 標(biāo)準(zhǔn)方法，準(zhǔn)確，操作麻煩，費時，靈敏度低，適用于標(biāo)準(zhǔn)的測定 |
| 紫外分光光度法 | 100—1000 | 大 | 280 205 | 靈敏，快速，不消耗樣品，核酸類物質(zhì)有影響 |
| 雙縮脲法 | 1000—10000 | 小 | 540 | 重復(fù)性、線性關(guān)系好，靈敏度低，測定范圍窄，樣品需要量大 |
| Folin-酚試劑法 | 20—500 | 大 | 750 | 靈敏，費時較長，干擾物質(zhì)多 |
| 考馬氏亮藍(lán)G-250 | 50—500 | 大 | 595 | 靈敏度高，穩(wěn)定，誤差較大，顏色會轉(zhuǎn)移 |
| BCA | 50—500 | 大 | 562 | 靈敏度高，穩(wěn)定，干擾因素少，費時較長 |
