會(huì)員.png)
10
當(dāng)前位置：東曹（上海）生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>丁基疏水色譜柱在使用方面還是有些技巧的
丁基疏水色譜柱在使用方面還是有些技巧的
丁基疏水色譜柱是一款以粒徑為2.5um的，丁基鍵合無(wú)孔型親水性聚合物基質(zhì)為填充劑的疏水作用色譜柱。適用于蛋白質(zhì)、單抗、酶等生物大分子的分離分析。由于和藥物安全以及生產(chǎn)成本息息相關(guān)，對(duì)于重組蛋白藥物（包括單抗）的非均一性分析變得越來(lái)越被重視。
采用具有適度疏水性的填料，以含鹽水溶液作流動(dòng)相，借助于溶質(zhì)與固定相間的疏水相互作用實(shí)現(xiàn)分離的色譜方法。其保留機(jī)理與反相色譜基本相同，所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相強(qiáng)，多為低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色譜主要用于蛋白質(zhì)的分離與純化。
以下是關(guān)于丁基疏水色譜柱的使用技巧：
1、樣品預(yù)處理：在使用之前，需要對(duì)樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理。這可能包括去除雜質(zhì)、調(diào)整樣品的pH值、離子強(qiáng)度等，以確保樣品適合在丁基疏水色譜柱上進(jìn)行分離。
2、選擇合適的緩沖液：在進(jìn)行丁基疏水色譜時(shí)，選擇合適的緩沖液對(duì)于分離效果至關(guān)重要。通常使用含有有機(jī)溶劑（如乙腈、異丙醇）的緩沖液，以促進(jìn)生物大分子與色譜柱填料的疏水相互作用。
3、優(yōu)化洗脫條件：根據(jù)樣品的特性和目的，優(yōu)化洗脫條件是非常重要的。通過(guò)調(diào)整洗脫緩沖液的成分、濃度和pH值，可以實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分子的高效洗脫。
4、控制流速和壓力：在使用時(shí)，需要注意控制流速和壓力，避免過(guò)高的流速和壓力導(dǎo)致柱子破裂或分離效果不佳。
5、監(jiān)測(cè)分離效果：在進(jìn)行分離過(guò)程中，定期監(jiān)測(cè)分離效果是必要的?？梢酝ㄟ^(guò)檢測(cè)吸光度、熒光強(qiáng)度等指標(biāo)來(lái)評(píng)估分離效果，并根據(jù)需要調(diào)整操作參數(shù)。
6、避免過(guò)載樣品：避免在樣品中加入過(guò)多的目標(biāo)分子，以免超出色譜柱的承載能力，影響分離效果。
7、注意保存和保養(yǎng)：在使用完后，需要注意正確保存和保養(yǎng)色譜柱，避免污染和損壞。定期清洗和校準(zhǔn)色譜柱，可以延長(zhǎng)其使用壽命并保持分離效果。