化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
微生物菌種的臨時存放及活化綜述
閱讀：346 發(fā)布時間：2025-2-6 菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，逐級擴(kuò)大培養(yǎng)得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復(fù)壯過程，因?yàn)楸４鏁r的條件往往和培養(yǎng)時的條件不相同，所以要活化，讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境。
一、一般菌種臨時存放及活化
1. 低溫保存管應(yīng)存放于－20℃ ~ －80℃之低溫條件下。
2. 準(zhǔn)備 37℃之 70﹪酒精浴槽（只能在電氣水浴槽中改放酒精，不可以火加溫，以免危險(xiǎn)；若以 37℃水浴取代，應(yīng)避免水中微生物污染），其中事先安放小試管架，液面不可高達(dá)管塞。
3. 將低溫保存管從低溫保存條件中取出，置于 37℃浴槽之小試管架上。
4. 不斷輕微搖動低溫保存管，液面不可高至管塞，直至結(jié)冰全溶解（約需 2 分鐘）。
無菌培養(yǎng):
1、用無菌微量吸管，從已溶解之低溫保存管 吸取 1-2滴之菌液，滴入固態(tài)指培養(yǎng)基某一邊緣附近，以劃線法接種于培養(yǎng)基。
2、將接種好的培養(yǎng)基置于指溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
平板劃線分離法:
平板劃線分離法是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的純種。有時這種單菌落并非都由單個細(xì)胞繁殖而來的，故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點(diǎn)到線"稀釋而達(dá)到分離目的的。
1. 手持金屬接種環(huán)，用酒精燈將接種環(huán)（共約5公分）燒至火紅，并不斷來回?zé)窘饘俟潭U之前約10cm，等待約10秒鐘，將接種環(huán)前端輕觸培養(yǎng)基邊緣凝膠（無菌體部份），待接種環(huán)全冷卻后，以環(huán)沾黏菌滴，由培養(yǎng)基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的并行線，直到涵蓋1/3培養(yǎng)基為止。
2. 灼燒接種環(huán)，待數(shù)秒冷卻后，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)基自I區(qū)涂布的邊緣再橫劃數(shù)條線到未接種的區(qū)域。
3. 重復(fù)2的動作完成。
4. 灼燒接種環(huán)，將接種環(huán)歸位。
（1）金屬接種環(huán)
（2）平板劃線法
二、一般操作過程
1、在無菌操作下，用無菌微量吸管，從已溶解的管中吸取50μL（或1-2滴）的菌液，滴入固態(tài)zhi定培養(yǎng)基（培養(yǎng)基編號及溫度示于菌株訂購單）某一邊緣附近，以劃線法接種于培養(yǎng)基。
2、將接種好的培養(yǎng)基置于zhi定溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3、在無菌環(huán)境下，以沾有75%酒精的棉花擦拭外管，在火焰上加熱外管之尖duan。滴數(shù)滴無菌水于加熱處，使外管破裂，再以硬棒敲破尖duan。取出隔熱纖維紙和內(nèi)管，以滅菌過的鑷子取出內(nèi)管之棉塞。
4、（a）適用于細(xì)菌用無菌吸管，吸取0.3-0.5mLzhi定之液體培養(yǎng)基，滴入內(nèi)管內(nèi)，并輕微震蕩（可用該吸管協(xié)助），直到均勻懸浮。
（b）適用于霉菌、酵母菌用無菌吸管，吸取0.3-0.5mL無菌水，滴入內(nèi)管內(nèi)，待干燥粉末溶解后，以無菌吸管吸取并滴入約含有5ml無菌水之試管內(nèi)，輕微震蕩使其均勻后，靜置30至60分鐘。
5、取0.1-0.2mL之菌體懸浮液于zhi定的平板培養(yǎng)基上，做劃線分離培養(yǎng)或做成一系列之稀釋，用無菌L型玻棒均勻涂抹，以檢驗(yàn)菌種之純度及活化情形，而剩余的菌體則全部移入zhi定的液體培養(yǎng)基內(nèi)，并依zhi定的溫度培養(yǎng)之。
6、某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，遲滯期較長，必須等培養(yǎng)二倍時間后才能長出，且再經(jīng)過一、二次繼代培養(yǎng)后才能正常生長。經(jīng)過以上的努力后仍培養(yǎng)失敗，才視為不能活化。
7、未開封之冷凍干燥管，請冷藏于4℃冰箱，切勿冷凍保存。