您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng)! 登錄| 免費(fèi)注冊(cè)| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
Exosome Isolation Kit (from cell culture media for NTA/TEM)
產(chǎn)品概述
介紹
EZBioscience®外泌體分離試劑盒(來(lái)自NTA/TEM細(xì)胞培養(yǎng)基)提供了一種簡(jiǎn)單、可靠和快速的方法,用于從細(xì)胞培養(yǎng)基、尿液、支氣管肺泡灌洗液(BALF)、腦脊液(CSF)樣品中分離高質(zhì)量完整的總外泌體,而無(wú)需超速離心。
外泌體是含有RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡(30-120nm),由培養(yǎng)物中的各種類型的細(xì)胞分泌,并在體液(如血液,唾液,尿液和母乳)中大量存在。據(jù)報(bào)道,外泌體作為細(xì)胞間信使發(fā)揮作用,在特定細(xì)胞之間傳遞效應(yīng)物或信號(hào)大分子;然而,它們的形成、貨物的組成以及它們所涉及的生物學(xué)途徑尚不清楚。
外泌體分離試劑盒(來(lái)自細(xì)胞培養(yǎng)基)提供了一種簡(jiǎn)單可靠的方法,可以從細(xì)胞培養(yǎng)基樣品中濃縮完整的外泌體。通過(guò)捆綁水分子,外泌體沉淀試劑迫使溶解性較低的組分(即外泌體)從溶液中取出,從而可以通過(guò)短暫且相對(duì)低速的離心收集它們。然后通過(guò)純化柱(0.22μm)純化重懸的外泌體。
之后,外泌體可用于RNA純化(用于RNA測(cè)序、RNA芯片、RT-qPCR)、蛋白質(zhì)提取、粒度檢測(cè)和電子顯微鏡等。
協(xié)議
一般準(zhǔn)則
a) 為確保分離的外泌體源自目標(biāo)細(xì)胞,請(qǐng)用外泌體耗盡胎牛血清(FBS)或無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,因?yàn)檎5腇BS含有ji高水平的外泌體,會(huì)污染細(xì)胞來(lái)源的外泌體。如果您無(wú)法獲得外泌體耗盡的FBS,某些細(xì)胞系可以在沒(méi)有FBS的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)長(zhǎng)達(dá)12小時(shí)。
b) 不建議使用外泌體沉淀試劑 (EPR) 從其他種類的樣品中分離外泌體。如果要從血漿中分離完整的外泌體,請(qǐng)使用全外泌體分離(從血漿中分離)試劑。
準(zhǔn)備樣品
1.收獲5~20ml細(xì)胞培養(yǎng)基(或尿液,支氣管肺泡灌洗液,腦脊液)。
2.將血漿樣品在3000 × g 在4°C下離心10分鐘以除去細(xì)胞和碎片。
3.將含有無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基的上清液轉(zhuǎn)移到新管中,而不會(huì)干擾沉淀。
分離外泌體
1.將所需體積的無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到新管中,并加入1/4體積的外泌體沉淀試劑(EPR)。
文化媒體 | 試劑 |
5毫升 | 1.25毫升 |
20毫升 | 5毫升 |
2.通過(guò)渦旋或倒置試管將培養(yǎng)基/試劑混合物充分混合,直到溶液均勻。將樣品在 2 ~ 8°C 下孵育過(guò)夜。
3.孵育后,將樣品在4°C下以10000×g離心30分鐘。
4.通過(guò)移液小心地吸出上清液并丟棄上清液。外泌體包含在管底部的沉淀中(在大多數(shù)情況下不可見(jiàn))。
重懸外泌體
1.向沉淀中加入1× PBS或類似的緩沖液,上下渦旋或移液以重懸外泌體。
啟動(dòng)文化媒體卷 | 重懸體積 |
1毫升 | 30微升 |
10毫升 | 60微升 |
2.一旦沉淀重懸,外泌體就可以進(jìn)行下游分析或通過(guò)親和方法進(jìn)一步純化。
注意:純化的外泌體樣品可以在2~8°C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)7天,也可以儲(chǔ)存在-80°C以下長(zhǎng)期儲(chǔ)存。為了最大限度地降低RNase污染的風(fēng)險(xiǎn),我們建議直接進(jìn)行進(jìn)一步的下游樣品處理。
產(chǎn)品詳情
名稱 Exosome Isolation Kit (from cell culture media for NTA/TEM)
編號(hào) EZB-exo2
品牌 ezbioscience
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購(gòu)買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。