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倒置顯微鏡通常屬于相差顯微鏡
閱讀：1574 發(fā)布時(shí)間：2023-4-12
倒置顯微鏡是一種結(jié)構(gòu)型態(tài)，相差顯微鏡是一種功能劃分，兩者無法直接對(duì)比。
倒置顯微鏡配備相差環(huán)板來實(shí)現(xiàn)相差
倒置生物顯微鏡通常屬于相差顯微鏡。倒置顯微鏡的透射光源在載物臺(tái)上，物鏡在載物臺(tái)下，故稱“倒置顯微鏡”。倒置生物顯微鏡的透射光源和物鏡都是長工作距離設(shè)計(jì)，通常會(huì)配備推拉式相差環(huán)板和相差物鏡，可實(shí)現(xiàn)相差觀察功能，以便觀察接近透明的未染色細(xì)胞等樣品。
正置也能實(shí)現(xiàn)相差（升級(jí)熒光和相差后的CX43）
正置顯微鏡也可以實(shí)現(xiàn)相襯觀察，只是相對(duì)少見。簡易的正置相襯使用類似倒置的推拉式相差環(huán)板，搭配帶插槽的聚光鏡，由于尺寸更小，精密度要求更高，而且可能還會(huì)有漏光等問題，更可靠的設(shè)計(jì)是轉(zhuǎn)盤式切換的聚光鏡，這是很多正置顯微鏡實(shí)現(xiàn)相襯切換的思路。
相差可以觀察透明細(xì)胞樣本
相差顯微鏡指能進(jìn)行相差觀察的顯微鏡，相差觀察又稱相襯觀察、澤尼克相襯法觀察，是一種利用相位差物理原理提升透明樣品對(duì)比度的技術(shù)，主要用于未染色的細(xì)胞等樣品，這些樣品在明場下幾乎是透明的，難以看清，而染色則會(huì)影響其活性因而不適用，通過相差觀察，樣品物質(zhì)和厚度的差異將會(huì)轉(zhuǎn)化成對(duì)比度，從而揭示明場觀察無法看清的細(xì)節(jié)。
相差不適合看厚的和楔形的樣品，升級(jí)DIC解決
相差觀察的優(yōu)點(diǎn)很明顯，它可以不用染色就看清培養(yǎng)皿中的細(xì)胞和水中的微生物等樣品，十分方便且實(shí)現(xiàn)成本低，局限在于不適合厚度大的樣品，以及楔型結(jié)構(gòu)的樣品，這些樣品可能需要用DIC微分干涉相襯或者HMC霍夫曼調(diào)制相襯來進(jìn)行觀察，前者具有非常好的立體感和的細(xì)節(jié)表現(xiàn)能力，但成本高，后者雖然會(huì)有色差問題，但能以顯著更低的成本實(shí)現(xiàn)類似DIC的強(qiáng)立體感，適合批量部署，因此在IVF輔助生殖等領(lǐng)域會(huì)有應(yīng)用。
除常規(guī)相差，還有特殊的負(fù)相差
相襯觀察還有正負(fù)和對(duì)比度高低之分，常見的相襯是正相襯，背景是亮色的，樣品被高亮光環(huán)包圍。而負(fù)相襯背景呈暗色，類似暗場，樣品主體會(huì)呈高亮。負(fù)相差物鏡有高對(duì)比（NH）和中對(duì)比度（NM）區(qū)別，會(huì)標(biāo)記在物鏡上。
無限遠(yuǎn)倒置熒光顯微鏡合成圖像
最后還有一點(diǎn)需要補(bǔ)充的是，固定筒長顯微鏡和無限遠(yuǎn)光學(xué)顯微鏡在相襯使用上的一個(gè)區(qū)別。在切換相襯和熒光觀察方式時(shí)，需要把光學(xué)元件移入和移出光路，對(duì)于固定筒長顯微鏡來說，額外的光學(xué)元件移入后，需要做補(bǔ)償以滿足固定筒長需要，作為結(jié)果，不同觀察方式會(huì)有一定的成像倍率差異，視野不是一致的。
無限遠(yuǎn)光學(xué)顯微鏡可以做到相襯成像視野和熒光成像視野一致，因此可以拍攝合成出有輪廓感/立體感的細(xì)胞熒光圖像。一般這需要先用平場消色差相襯物鏡拍攝相襯，然后切換到半復(fù)消色差物鏡拍攝熒光，以免損失熒光亮度，為了方便用戶進(jìn)行這種拍攝，明美還推出了半復(fù)消色差相襯物鏡，可以一個(gè)物鏡把相襯和熒光都拍好。