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層析柱的主要操作方法詳解

閱讀:5927發(fā)布時(shí)間:2019-5-22

1.吸附劑的處理及柱子裝填:

將一定量薄層層析硅膠裝入搪瓷盤(pán)置于烘箱中,于105。C活化2H后,取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充,填滿(mǎn)整個(gè)柱體,不留死體積,密封后用柱塞式計(jì)量溶劑泵按丙酮一石油醚(595)比例泵入溶劑,至溶劑流出止。

2.上樣:

將冬凌草的乙醇提取物400G用適量丙酮溶解,泵入中壓柱柱頭,然后泵入石油醚1000RID。

3.洗脫:

以一定比例的石油醚一丙酮為洗脫液,60ML/MIN的流速進(jìn)行梯度洗脫,柱的使用壓力為23KG/C 。按每份500ML收集,TLC檢識(shí)展開(kāi)劑丙酮一氯仿(28),顯色劑5%香草醛濃硫酸乙醇液

至洗脫*,相同流份合并,回收溶劑。將冬凌草甲素流份合并蒸干。加入適量甲醇熱溶后自然放置,析出結(jié)晶,為冬凌草甲素。

4.層析柱再生、平衡:

有效成分經(jīng)TLC檢識(shí)全部流出后,用純丙酮5000ML再生,丙酮一石油醚(595)平衡后,可再次上樣,反復(fù)使用(使用次數(shù)隨原料不同而異,一般可連續(xù)使用26個(gè)月以上)。

5.重結(jié)晶:

冬凌草甲素結(jié)晶析出*后,減壓過(guò)濾,然后用少量甲醇洗滌(洗滌液保留,作下次熱溶冬凌草甲素用)。將冬凌草甲素再用適量甲醇熱溶后放置,結(jié)晶再次析出,待結(jié)晶*后,抽濾,用少量乙醚洗滌,將結(jié)晶室溫下晾干后置真空干燥箱中,35度真空干燥至恒重。密封于瓶中,置干燥器中保存。

6.薄層層析分析:

取適量冬凌草甲素對(duì)照品及由上述方法得到的冬凌草甲素樣品甲醇溶解后點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以氯仿一丙酮(82)為展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi),5% 香草醛濃硫酸乙醇液顯色,于105。C烘至斑點(diǎn)清晰。表明在該展開(kāi)系統(tǒng)下,冬凌草甲素樣品和對(duì)照品都具有相同的RF值,并呈現(xiàn)出同樣的藍(lán)綠色斑點(diǎn),在制備的冬凌草甲素樣品中,沒(méi)有雜質(zhì)斑痕。


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