注意事項(xiàng)
1、電泳中使用的溴化乙錠（EB）為中度毒性、強(qiáng)致癌性物質(zhì)，務(wù)必小心，勿沾染于衣物、
皮膚、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在專門電泳區(qū)域操作，戴一次性手套，并及時(shí)更換。
2、預(yù)先加入EB 時(shí)可能使 DNA 的運(yùn)動(dòng)速度下降15%左右，且不同構(gòu)型的 DNA 的影響程度不同。所以為取得較真實(shí)的電泳結(jié)果可以在電泳結(jié)束后再用 0.5μg/ml 的 EB 溶液浸泡染色。EB在光照下易降解，若凝膠放置一段時(shí)間后才觀察，即使原來膠內(nèi)或樣品已加 EB，建議選擇EB溶液浸泡染色。
3、加樣進(jìn)膠時(shí)不要形成氣泡，需在凝膠液未凝固之前及時(shí)**，否則，需重新制膠。
4、電泳時(shí)溴酚蘭在瓊脂糖凝膠中的運(yùn)動(dòng)速度可以用于參考電泳速度，已實(shí)際電泳條帶運(yùn)動(dòng)速度為準(zhǔn)。
常見問題分析

常見問題	原因	對(duì)策
DNA條帶模糊	DNA降解	實(shí)驗(yàn)過程避免核酸酶污染
	電泳緩沖液陳舊	電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低，PH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果。TBE建議使用10次就更換緩沖液
	所用電泳條件不合適	電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過6V/CM，溫度＜30℃，巨大DNA鏈電泳，溫度應(yīng)＜15℃，核查所用電泳緩沖液的緩沖能力，注意經(jīng)常更換
	DNA上樣量過多	減少凝膠中DNA上樣量
	DNA含鹽過高	電泳前通過乙醇沉淀去除多余鹽分
	有蛋白污染	電泳前酚抽提去除蛋白
	DNA變性	電泳前勿加熱，用TE緩沖液稀釋DNA
出現(xiàn)片狀拖帶或涂抹帶	PCR擴(kuò)增有時(shí)出現(xiàn)涂抹帶或片狀帶或地毯樣帶。其原因往往PCR體系需要優(yōu)化，PCR程序需要摸索。	其對(duì)策有：調(diào)整PCR體系和PCR程序，摸索出合適的條件。
不規(guī)則DNA帶遷移	電泳條件不合適	電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過6V/CM，溫度＜30℃，巨大DNA鏈電泳，溫度應(yīng)＜15℃，核查所用電泳緩沖液的緩沖能力，注意經(jīng)常更換
不規(guī)則DNA帶遷移	DNA變性	電泳前勿加熱，用TE緩沖液稀釋DNA
帶弱或無(wú)DNA帶	DNA上樣量不夠	增加DNA上樣量，聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度高，上樣量可適當(dāng)降低
	DNA降解	實(shí)驗(yàn)過程避免核酸酶污染
	DNA跑出凝膠	縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度
	EB染色的DNA，所用光源不合適	應(yīng)用短波長(zhǎng)（254nm）的紫外光源
DNA帶缺失	DNA跑出凝膠	縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度
	分子大小相近的DNA帶不易分辨	增加電泳時(shí)間，核準(zhǔn)正確凝膠濃度
	DNA變性	電泳前勿加熱，用20mM Nacl 緩沖液稀釋DNA
	DNA鏈巨大，常規(guī)凝膠電泳不合適	在脈沖凝膠電泳上分析
電泳時(shí)Ladder扭曲	配膠的緩沖液和電泳緩沖液不是同時(shí)配置	同時(shí)配置，電泳緩沖液高出液面1-2mm即可
電泳時(shí)Ladder扭曲	電泳時(shí)電壓過高	電泳時(shí)電壓不應(yīng)超過6V/CM

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電泳儀常見問題處理方法

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