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abi7500熒光定量pcr使用方法

時間:2020/1/31閱讀:4819
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abi7500熒光定量pcr使用方法

Q:7500快速定量PCR儀可以使用0.2ml PCR反應(yīng)管或者96孔板嗎?

A:不可以,7500 快速定量PCR儀只支持0.1ml PCR反應(yīng)管或者96孔板

Q:如何監(jiān)控反應(yīng)體系是否有蒸發(fā)?

A:查看Rox信號是否在整個PCR過程中保持一致。在多組分圖譜界面,選擇單孔,如果Rox信號逐漸增高,代表樣品孔中有蒸發(fā)。如下圖所示:

Q:內(nèi)參基因與目標基因是否需要在相同的反應(yīng)板上運行相對定量?

A:是,內(nèi)參基因必須和目標基因在相同的反應(yīng)板上。軟件可以根據(jù)在相同反應(yīng)板上的內(nèi)參基因和目標基因自動進行相對定量計算,并計算估值區(qū)間。

Q:定量PCR系統(tǒng)支持的熒光染料有哪些?

A:下面是實時定量PCR儀器能夠檢測染料的表:

DYE

7300

7500

7900

Cy3™

 

X

 

Cy5™

 

X

 

FAM™

X

X

X

JOE™

X

X

X

NED™

X

X

X

ROX™

X

X

X

SYBR® Green I

X

X

X

TAMRA™

X

X

X

Texas Red®

 

X

 

TET™

 

 

X

VIC®

X

X

X

Q:用戶是否可以添加自定義染料?

A:可以,可以添加自定義染料,但染料的激發(fā)和發(fā)射波長必須與儀器的濾光片設(shè)置兼容。

Q:常用熒光染料的發(fā)射波長為多少?

A:

染料名稱

發(fā)射波長(nm)

FAM™

~520

SYBR® Green I

~520

TET™

~540

JOE™

~550

VIC®

~550

NED™

~580

CY3™

~580

TAMRA™

~580

ROX™

~610

Texas Red®

~610

CY5™

~670

Q:ABI各種型號的定量PCR儀有什么特點?

A:

◆ 7300、7500、7500 快速系統(tǒng)是用鹵鎢燈作為激發(fā)光源,并利用濾光片檢測激發(fā)熒光

◆ 7300是一個激發(fā)光和四色濾光片

◆ 7500和7500快速有五個激發(fā)光和五個濾光片,所以可以檢測遠紅外。

◆ 7900HT系統(tǒng)是用氬離子激光作為激發(fā)光源,可以掃描500nm -650nm所有波長的熒光

◆ 7900HT系統(tǒng)可以提供更高通量,如 384孔板和低密度芯片升級,以及自動手臂來裝載反應(yīng)板設(shè)備

Q:BHQ作為探針的淬滅基團,在ABI定量PCR系統(tǒng)如何設(shè)定?

A:淬滅基團設(shè)為none。

Q:7300/7500/7900HT定量PCR系統(tǒng)軟件生成的文件有哪些?

A:針對7300 v1.4及以下版本軟件,7500 v1.4 及以下版本軟件,7900HT軟件生成的文件,包含擴增曲線的為數(shù)據(jù)文件,以 sds為文件后綴。相對定量分析產(chǎn)生以sdm為后綴文件,設(shè)置模板以 sdt為后綴。

針對7500 v2.0版本軟件,包含擴增曲線的為數(shù)據(jù)文件,以 eds為文件后綴。相對定量分析產(chǎn)生以edm為后綴文件,設(shè)置模板以 edt為后綴。

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