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是誰(shuí)的PCR實(shí)驗(yàn)又失敗了?

閱讀:313      發(fā)布時(shí)間:2023-10-13
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時(shí)間:周五下午
坐標(biāo):實(shí)驗(yàn)室
認(rèn)真點(diǎn)完96孔板的你,貼上封板膜,放入PCR儀,跑完4小時(shí)的程序后準(zhǔn)備美美下班。看了一眼數(shù)據(jù),再看一眼PCR板——
你(瞳孔地震):“師兄!跑完P(guān)CR,邊緣孔的液體體積怎么看起來少了?”

你師兄(仔細(xì)觀察):“把‘看起來’去掉。”


原來是因?yàn)?/span>

實(shí)驗(yàn)室前輩們總結(jié)出了影響PCR的n大要素,反應(yīng)步驟、引物設(shè)計(jì)……PCR板的選擇往往是最容易被忽視的,但同樣至關(guān)重要。


 

劃重點(diǎn):PCR板的選擇,你避坑了嗎?


 

1. 污染源
從核酸提取開始到后續(xù)目的片段定向擴(kuò)增,都要在無DNase與RNase、無PCR抑制劑的環(huán)境中進(jìn)行,否則這些污染物會(huì)大大降低擴(kuò)增效率。這是PCR耗材的基本要求,質(zhì)量的關(guān)鍵取決于生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度和工藝質(zhì)控。

 

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2. 硬度
硬質(zhì)框架PCR板比普通PCR板有更高的硬度,不會(huì)出現(xiàn)“翹邊”的現(xiàn)象,在貼膜的時(shí)候方便對(duì)每個(gè)孔“雨露均沾”,達(dá)到良好的密封性。

 

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3. 蒸發(fā)率
PCR實(shí)驗(yàn)在小體系(微升級(jí)別)中反應(yīng),且程序包含溫度的循環(huán)升降,這些都容易造成體系蒸發(fā)的邊緣效應(yīng),影響產(chǎn)物濃度。因此PCR板需搭配高質(zhì)量的封板膜,降低體系蒸發(fā)率,確保最終數(shù)據(jù)的可靠性。

 

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4小時(shí)PCR后的剩余體積 (初始體積-20ul)

 

4. 熒光轉(zhuǎn)化率
PCR孔壁經(jīng)特殊設(shè)計(jì)的二氧化鈦著色工藝,能優(yōu)化熒光定量PCR (qRCR) 反應(yīng)的熒光信號(hào)反射效率,減少孔間信號(hào)交叉污染。相較于透明的PCR耗材,白色PCR板和PCR管的孔壁能更靈敏地反射熒光信號(hào),優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

 

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特殊著色工藝的白色PCR耗材優(yōu)化熒光信號(hào)結(jié)果

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  • 不含DNA、DNase、RNase、PCR抑制劑,在超過3000平方米的潔凈受控車間生產(chǎn),環(huán)境滿足ISO 14 644-1的5級(jí)、7級(jí)和8級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

  • 機(jī)械強(qiáng)度好,不翹邊,易貼膜。

  • 搭配封板膜使用,減少蒸發(fā)邊緣效應(yīng)。

  • 白色PCR產(chǎn)品優(yōu)化熒光反射,減少孔間信號(hào)交叉污染。

 

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