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制備型液相色譜儀分離和純化優(yōu)化方法介紹

閱讀:2951      發(fā)布時(shí)間:2018-9-6
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     廣州艾欣科學(xué)儀器有限公司為您提供全面的制備型液相色譜儀分離/純化優(yōu)化方法,制備色譜柱的選擇方法等。
  一、制備型液相色譜儀的選擇方法
  1、分離模式的選擇(在樣品可能分離的條件下使用分析色譜柱進(jìn)行測試)
  如果樣品有多種可分離的模式,請?jiān)谶x擇上考慮以下幾點(diǎn)
  1)分離的效率:分離能力、樣品上樣量、制備時(shí)間;
  2)經(jīng)濟(jì)性:填料、流動(dòng)相的成本、單位時(shí)間的處理量;
  3)其他:安全性、目標(biāo)成分的變性、系統(tǒng)的簡易性。
  2、制備規(guī)模的選擇
  根據(jù)樣品的處理量選擇制備柱的內(nèi)徑以及填料的粒徑。表1列舉了選擇制備柱內(nèi)徑和填料粒徑的基本標(biāo)準(zhǔn)。
  選擇制備柱內(nèi)徑和填料粒徑的基本標(biāo)準(zhǔn)
  1)制備柱內(nèi)徑
  樣品的上樣量與制備柱的橫截面積是成正比的,所以必須要選擇適合樣品上樣量的制備柱內(nèi)徑。
  2)填料的粒徑
  填料的粒徑越小制備柱的柱效越高,同時(shí)填料的價(jià)格也越高。另外由于柱壓也會(huì)變高,因此對所使用設(shè)備的耐壓性要求也會(huì)相應(yīng)的提高。
  在目標(biāo)成分與相近的峰分離不充分等情況下,可選擇使用粒徑小的填料來提高分離效果。反之,粒徑越大制備柱的柱效就越低,當(dāng)然填料的價(jià)格也更便宜,柱壓也會(huì)隨之降低。
  3)制備柱的長度
  柱長越長分離能力就越高,樣品的上樣量也會(huì)增加。但由于柱長和柱壓成正比,因此柱子越長柱壓也就越高。
  二、制備條件的優(yōu)化
  根據(jù)使用的粒徑確定制備條件
  使用已確定粒徑大小的填料對樣品的分離進(jìn)行測試。測試時(shí)使用分析色譜柱,并對制備條件進(jìn)行優(yōu)化
  為了能更有效地進(jìn)行制備條件的摸索,我們推薦使用YMC-Pack R&D系列色譜柱。
  1、洗脫條件的優(yōu)化
  制備不同于分析,首先要考慮的是更有效地得到更高純度的目標(biāo)成分和高收率。進(jìn)行制備的關(guān)鍵點(diǎn)是在考慮必須分離的物質(zhì)和其余物質(zhì)的基礎(chǔ)上來設(shè)定洗脫條件。
  由于制備所用的填料粒徑比分析用的填料粒徑大,因此柱效會(huì)有所降低,可能得不到一些必要的分離。在這種情況下,通過調(diào)整洗脫條件及降低線流速可改善分離。
  即使這樣分離仍然不充分的話,可嘗試改變柱長和填料粒徑。
  2、上樣量的摸索
  分階段增加上樣量,從而求得能得到目標(biāo)純度的大上樣量。然后根據(jù)大上樣量來計(jì)算放大到制備色譜柱的上樣量。
  3、制備型液相色譜儀的合理性確認(rèn)
  實(shí)際進(jìn)行制備時(shí)首先需確認(rèn)流速和柱壓等是否適合設(shè)備的性能。如果要在制備柱上取得和分析測試時(shí)一樣的分離效果,線流速必須要與分析測試時(shí)柱的數(shù)值保持一致,制備柱的流速可通過按測試用柱的流速的橫切面積的正比來設(shè)定,從而獲得相同的線流速。
  如果線流速是一致的,那制備柱的壓力和測試用柱的壓力也是相同的。
  如果柱壓超過設(shè)備的耐壓限度,必須改變流速、柱長等條件。并且管線等也需要更改為適合流速的尺寸。

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