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技術(shù)文章

集落刺激因子(CSF)的測(cè)定

閱讀:529          發(fā)布時(shí)間:2012-7-28

(一)生物活性檢測(cè)法
1.骨髓細(xì)胞集落形成法
(1)用含有10%FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液制備0.3%~0.4%的軟瓊脂。
(2)用淋巴細(xì)胞分層液分離得到骨髓單個(gè)核細(xì)胞,以3×104—5×104細(xì)胞/mL接種于軟瓊脂中,鋪在無(wú)菌平皿內(nèi);37~C,5%C02溫箱中培養(yǎng)14d。
(3)顯微鏡下計(jì)數(shù)大于或等于40個(gè)細(xì)胞的集落形成數(shù),計(jì)算出集落刺激活力(colonystimulatingactivity,CSA),計(jì)算公式如下:
CSA=集落形成數(shù)/105骨髓單個(gè)核細(xì)胞

2.依賴株3H-TdR摻人法 GM-CSF的依賴細(xì)胞株是DA3.15和IF-1; M-CSF和G-CSF的依賴細(xì)胞株分別是M14和NES60.4。操作步驟同依賴株測(cè)IL-3。

(二)分子生物學(xué)方法
利用CSF特異性cDNA探針,檢測(cè)細(xì)胞中特定的mRNA表達(dá),可用CL.LYl+2—9細(xì)胞作對(duì)照。

(三)免疫學(xué)方法
同常規(guī)雙抗體夾心ELISA法,該法能夠檢測(cè)到Pg/mL水平。國(guó)內(nèi)已有試劑盒出售。

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