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技術(shù)文章

B9-11細(xì)胞增殖法檢測(cè)IL—11

閱讀:1356          發(fā)布時(shí)間:2012-5-5

通過對(duì)B9細(xì)胞的反復(fù)克隆,篩選出對(duì)IL-11高度敏感的B9-11細(xì)胞株,可用于IL11的檢測(cè)。

1.B9-11細(xì)胞的克隆 ①向96孔培養(yǎng)板中每孔加入100uL含5%FCS和100ng/mL rIL-11的PMI-1640培養(yǎng)液;②加B9-11細(xì)胞于每孔l、3、9和27個(gè)細(xì)胞,每一細(xì)胞濃度做一板,培養(yǎng)2周,陽性生長(zhǎng)孔定期更換培養(yǎng)液和補(bǔ)充rIL-1③取出生長(zhǎng)較好孔內(nèi)細(xì)胞,測(cè)其對(duì)IL-11的敏感度,所需IL-11濃度zui低的細(xì)胞克隆為B9-11克隆。

2.在96孔板中每孔加50rtl用含5%FCSRPMI-1640系列稀釋的待測(cè)樣品和5X103B9-11細(xì)胞,每孔終體積為150$tL。5%c02 37~C溫箱中培養(yǎng)4d

3.加MTF溫育4h,加酸化異丙醇溶解甲臘,測(cè)630nm—5701an的吸光度值。IL-11活性以UTll65表示,即B9-11細(xì)胞發(fā)生50%zui大增殖時(shí)稀釋度的倒數(shù)除以30(因B9-11細(xì)胞對(duì)IL-11的敏感度為T1165細(xì)胞的30倍)。

4.注意事項(xiàng) 測(cè)定生物標(biāo)本應(yīng)加抗IL-6McAb以中和IL-6對(duì)結(jié)果的影響。
 

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