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技術(shù)文章

膠體金探針的質(zhì)量鑒定

閱讀:856          發(fā)布時間:2012-4-7

1。金顆粒的大小及均勻度
用有Formvar支持膜的鎳網(wǎng)蘸取金標記試劑,空氣干燥后,透射電鏡下觀察金顆粒的大小及均勻度,計算平均直徑,如電鏡放大倍數(shù)10萬,照片放大為2.5倍,100000×2.5=250000=25nm??諝庵懈稍锖笠宜徕欂撊?,在透射電鏡下觀察,可見金顆粒周圍有一明顯的空暈,表示顆粒表面吸附著蛋白質(zhì)分子。

支持膜(火棉膠膜)的制備;50mil5%的火棉膠+50mi乙酸戊酯,戊酯火棉膠。

2。用免疫細胞化學(xué)濾紙模型鑒定免疫金制劑的特異性和敏感性制得2.5%的乙酸
在WhatmamI號濾紙條上滴加2//l的抗原溶液(含抗原量分別為1ug、l00ng、10ng、3ng和lng),干燥后,紙條在甲醛蒸氣中固定。加適當稀釋的抗體作用1h,用TBS(0.05mol/LpH7.4Tris緩沖液,含.15mol/LNaCl),1%Triton X-l00洗3次,每次10rain。隨后,紙條再用洗脫SephacrylS-400柱的相同洗脫緩沖液洗lOmin,再滴加不同稀釋度的金標探針孵育1h。紙條再用TBS-Triton緩沖液洗3次,每次10rain。用TBS(不含TritonX—100)洗10min。再用雙蒸水洗3次各5min。用銀顯影液顯影30—40min。用雙蒸水洗終止顯影。

也可用下法試驗金探針:將系列稀釋的1:100、1;200、l;500、1:1000和l:10000的正常兔血清2/11分別滴加在濾紙條上,然后用甲醛蒸氣固定,紙片再用適當稀釋的羊抗兔IgG金探針在室溫中孵育1h,洗滌,再按上述方法用銀顯影。這方法可以初步測定金探針的質(zhì)量,也可用于一些抗原分析研究。

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