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技術(shù)文章

透射比濁法測(cè)定血清C3含量

閱讀:764          發(fā)布時(shí)間:2012-3-3

1. 原理 血樣本中C3與抗C3血清在液相中反應(yīng),比例合適時(shí)形成可溶性免疫復(fù)合物。聚乙二醇(PEG6 000)可沉淀其免疫復(fù)合物,使溶液的透光率(T)下降。免疫復(fù)合物的量與C3和抗C3量呈函數(shù)關(guān)系,當(dāng)固定抗C3濃度時(shí),免疫復(fù)合物的形成量主要取決于樣本中C3的含量,并與其呈正相關(guān)。故通過(guò)檢測(cè)溶液吸光度值即可判定樣本中C3含量。

2.主要試劑
(1)抗C3血清:有試劑出售,一般按說(shuō)明書(shū)的效價(jià)使用,也可預(yù)先用方陣法滴定其效價(jià)。試驗(yàn)時(shí)按zui適工作濃度稀釋。
(2)稀釋液:PEG 6 1300 dO.00g,NaF 10.00g,NaaHP04·12H20 101.50g,Nail2P04·2H2010.00g,NaN31.0g,加蒸餾水溶解至1 000mL。用C3玻璃濾器過(guò)濾,室溫保存。

3.操作步驟 將抗C3血清按所示效價(jià)稀釋?zhuān)拥骄郾揭蚁┓磻?yīng)板孔中,156~L/孔,然后每孔加入不同稀釋度的待測(cè)血清4ul,于微型混合器上振蕩混勻hnin,置37℃水浴30min后,取出混勻,用酶標(biāo)儀測(cè)定其490nm吸光度。用抗C3血清溶液160tzL作空白調(diào)零。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可得知樣本中C3含量。正常值為1.417±0.2396/L(X±SD)。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:在5個(gè)反應(yīng)板微孑L中分別加入稀釋抗C3血清158、156、154、152、150gL,再將C3含量標(biāo)準(zhǔn)品溶解后取2、4、6、8、10/~L分別加至相應(yīng)各孔,zui終體積各為160gul于微型混合器上振蕩lmin,置37℃水浴30min,取出后混勻,用酶標(biāo)儀分別測(cè)定490nm吸光度。以C3含量為橫坐標(biāo)、吸光值為縱坐標(biāo),制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

補(bǔ)體其他成分也可用此法測(cè)定。

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