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技術(shù)文章

補(bǔ)體遺傳多態(tài)性的檢測(cè)

閱讀:977          發(fā)布時(shí)間:2012-2-25

補(bǔ)體遺傳多態(tài)性的檢測(cè)大多分二步進(jìn)行,*步是用瓊脂糖高壓電泳或聚丙烯酰胺等電聚焦電泳將EDTA抗凝血漿通過凝膠電泳,根據(jù)分子量的大小、所帶電荷的多少及等電點(diǎn)(p1)將血漿蛋白分開。第二步是免疫固定或溶血鑒定,瓊脂糖高壓電泳或聚丙烯酰胺等電聚焦后,在凝膠板上鋪上抗補(bǔ)體某一成分的抗血清,使其與凝膠板上的抗原結(jié)合,形成分子量較大的免疫復(fù)合物沉淀嵌在凝膠孔中,不易漂洗掉,故稱免疫固定。將免疫固定后的凝膠板在生理鹽水中漂洗,除去其他蛋白成分??靖?,考馬斯亮藍(lán)染色。

依照第六屆補(bǔ)體定型會(huì)議標(biāo)準(zhǔn)或標(biāo)準(zhǔn)品,判斷待測(cè)樣本補(bǔ)體的同種異型。或用溶血法將致敏SRBC和缺乏某一補(bǔ)體成分的豚鼠血清或人血清混合,傾倒在電泳完畢的凝膠板上,凝膠板上的待測(cè)補(bǔ)體成分使缺乏的補(bǔ)體成分得以補(bǔ)償,酶反應(yīng)發(fā)生,導(dǎo)致溶血反應(yīng),凝膠板上可出現(xiàn)待測(cè)樣本補(bǔ)體某一成分的溶血帶。

補(bǔ)體C4有兩個(gè)基因座位,分別為C4A、C4B,兩者均表現(xiàn)高度的遺傳多態(tài)性,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)30余種同種異型。C4遺傳多態(tài)性在人類淵源、法醫(yī)鑒定及與疾病相關(guān)的研究領(lǐng)域受到極大的重視。C4遺傳多態(tài)性的檢測(cè)方法可分兩種,一種是瓊脂糖高壓電泳加免疫固定,另一種是瓊脂糖高壓電泳后加溶血覆蓋。在有抗血清的情況下,使用前者簡(jiǎn)單、方便、易行。僅在C4兩個(gè)基因座位不易辨別時(shí)才采用后者。

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