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技術(shù)文章

補(bǔ)體C4溶血覆蓋技術(shù)

閱讀:574          發(fā)布時(shí)間:2012-2-25

電泳是通過(guò)電場(chǎng)作用將C4遷移率不同的同種異型分離開(kāi),然后依照分型標(biāo)準(zhǔn)定型。在某些情況下,C4A某種同種異型與C4B某種同種異型遷移率相同不易區(qū)分開(kāi),此時(shí)可用溶血覆蓋技術(shù)加以區(qū)別。

1.原理 用肼處理豚鼠血清,可滅活其補(bǔ)體成分C4,使之成為幟缺乏的血清。將C4缺乏的豚鼠血清與致敏的SRBCl昆合,因缺乏C4,補(bǔ)體的攻膜效應(yīng)不能發(fā)揮,將?昆合物與一定濃度瓊脂糖混合傾注在電泳完畢的凝膠板上,凝膠板上C4區(qū)帶使混合物中的C4成分得以補(bǔ)償,溶血反應(yīng)發(fā)生,凝膠板上C4條帶區(qū)可出現(xiàn)透明溶血帶。C4B的溶血活性較C4A高,先發(fā)生溶血反應(yīng),因此可用此法將不易區(qū)別的C4A與C4B區(qū)分開(kāi)來(lái)。

2.主要試劑
R4豚鼠血清的制備:取正常豚鼠血清lmL加0.16mol/L的水合肼0.1mL,37℃2ho
3.操作步驟
(1)取SRBC 5mL用生理鹽水洗3次,用GVB2+配成10%的濃度。
(2)取5mLl0%SRBC加50gL0.2mol/LEDTA和5mL 6U的溶血素混合,37℃30min。注意應(yīng)經(jīng)常搖勻,使抗原與抗體分子充分接觸,然后用生理鹽水洗2次,GV妒‘洗1次。
(3)根據(jù)凝膠板的大小做一個(gè)有機(jī)玻璃框,厚度為lmm,壓在電泳完畢的凝膠板上。
(4)用GVB2+配制1%的瓊脂糖,隔水煮沸,待其*透明后放50~C恒溫水浴中冷卻至50~C時(shí)加入1.5mLEA與1.5mLR4豚鼠血清,充分?昆合,傾注在凝膠板上。
(5)37℃孵育約10rain,直至觀察到C4B溶血帶出現(xiàn)且清晰為止。用1%戊二醛固定,PBS漂洗,干燥保存。

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