化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
MTF比色法測(cè)定slL-1的生物活性
閱讀：1431 發(fā)布時(shí)間：2011-12-17四甲基偶氮唑鹽[3—（4.5-dimethylthiazol-2-Y1）-2，5-diphenyltetmzolimnbromide，MTF）在活細(xì)胞線粒體的琥珀酸脫氫酶作用下，被還原成藍(lán)黑色的MTr-甲脂，形成MTr-甲鐕的量與細(xì)胞增殖程度呈正相關(guān)。故通過(guò)測(cè)定細(xì)胞形成MTF-甲鐕量，可間接定量分析細(xì)胞的增殖情況，具體步驟如下：
（1）用PBS溶解MTT為5mg／mL，用0．22／zm膜濾器除菌及雜質(zhì)。
（2）加MTF至培養(yǎng)的細(xì)胞及IL-1樣品中，10uL／孔，37~C溫育4ho
（3）于每孔加酸化異丙醇100t~L／孔，充分混勻以溶解底物。酸性條件使培養(yǎng)液中酚紅指示劑變?yōu)辄S色，以利于對(duì)MTr-甲脂轉(zhuǎn)化物的測(cè)定。
（4）將微量測(cè)定板置室溫?cái)?shù)分鐘，保證轉(zhuǎn)變的底物結(jié)晶被溶解。
（5）置酶標(biāo)儀，調(diào)整檢測(cè)波長(zhǎng)為570nm，參考波長(zhǎng)為630nm。測(cè)定應(yīng)在酸化異丙醇加入后1h內(nèi)完成。