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技術(shù)文章

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELlSA)診斷禽流感

閱讀:1036          發(fā)布時(shí)間:2011-7-12

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)(enzyme inmmnosorbent assay,ELISA),以免疫過(guò)氧化物酶技術(shù)為基礎(chǔ),創(chuàng)立于1971年。它的基本原理是將抗原或抗體吸附到固相載體的表面,并仍能保持其免疫活性;抗原或抗體與酶所形成的結(jié)合物各自保持其免疫學(xué)活性和酶的催化活性;結(jié)合物與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)后,免疫復(fù)合物上的酶在遇到相應(yīng)的底物時(shí),可催化底物水解、氧化或還原,從而產(chǎn)生有色物質(zhì),可用肉眼觀察。由于反應(yīng)顏色的深淺與相應(yīng)抗體或抗原的量成正比,故可對(duì)抗體或抗原進(jìn)行定量測(cè)定。1974年Jennings等首先用ELISA對(duì)注射流感病毒所產(chǎn)生的抗體消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行了檢測(cè),Lanbre認(rèn)為ELlSA的敏感性遠(yuǎn)高于HI和補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。Meulemans(1987)對(duì)ELISA、AGP、HI檢測(cè)AIV抗體進(jìn)行了比較研究發(fā)現(xiàn),AGP和ELISA一樣均能檢測(cè)型特異性抗原(抗體),但其敏感性遠(yuǎn)低于ELISA,HI適用于亞型的檢測(cè),其敏感性也不如ELISA。

李海燕等用桿狀病毒表達(dá)的AIV病毒核蛋白制備抗原,建立了以桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)的AIV核蛋白為抗原的禽流感間接(重組核蛋白)ELISA診斷技術(shù)(rNPELISA)。實(shí)驗(yàn)證明,rNP-ELISA與全病毒間接ELISA(AIV-ELISA),AGP及HI的符合率分別為99.9%、97.1%和98.8%,并能100%檢出AGP陽(yáng)性及疑似HI陽(yáng)性的血清樣品,這證明了rNP-ELISA是檢測(cè)A型AIV血清特異性抗體的一種特異、敏感、微量、快捷和經(jīng)濟(jì)的血清學(xué)診斷技術(shù)。

1993年,Skodihall建立了快速診斷的DAS-ELISA,大大縮短了診斷時(shí)間,用混合纖維素酯膜或硝酸纖維素膜代替微量反應(yīng)板,可保留ELlSA的特異性、敏感性,其結(jié)果又不需要特殊儀器分析,可肉眼判定。ELlSA法已成為AIV流行病學(xué)普查及早期快速診的zui有效和*的方法。

ELISA方法的敏感性和特異性與抗原的純度直接相關(guān),1984年Abraham等報(bào)道了抗原快速提純法,所需時(shí)間與常規(guī)的抗原提純法相比縮短10倍,ELISA成為Al流行病學(xué)普查及早期快速診斷的zui有效和*的方法。

 

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