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在疫區(qū)根據(jù)流行病學(xué)特點(diǎn)，2個(gè)月以上家兔發(fā)病快、死亡率高并出現(xiàn)典型的臨診癥狀和病理變化，一般可以作出診斷。在新疫區(qū)要確診可進(jìn)行病原學(xué)檢查和血清學(xué)試驗(yàn)等。

1．病毒檢查
取肝病料1Q％乳劑，超聲波處理，高速離心，收集病毒，負(fù)染色后電鏡觀(guān)察，可發(fā)現(xiàn)一種直徑為25～35nm，表面有短纖突的病毒顆粒。

2．動(dòng)物試驗(yàn)
該病毒只感染兔，其他動(dòng)物不感染。取病兔肝、脾等組織懸液的離心上清液，經(jīng)雙抗處理后，以多種方式接種非免疫青年兔，可成功復(fù)制該病，并從患兔體內(nèi)分離到該病毒。也可將病兔肝、脾做成1：10懸液，給試驗(yàn)組兔同時(shí)注射高免血清3mi和懸液1ml，另設(shè)幾只注射病料懸液的對(duì)照兔，如試驗(yàn)組兔精神、食欲、體溫均正常，對(duì)照兔死亡，可確診是RHD。

3．血凝與血凝抑制試驗(yàn)
肝病料lo％乳劑高速離心后的上清液與用生理鹽水配制的o．75％的人[）型紅細(xì)胞懸液進(jìn)行微量血凝試驗(yàn)，在4℃或25℃作用兒．凝集價(jià)大于1：160判為陽(yáng)性（另外也能凝集人類(lèi)B型，AB型紅細(xì)胞，呈現(xiàn)強(qiáng)烈的陽(yáng)性反應(yīng)）。再用已知陽(yáng)性血清做血凝抑制試驗(yàn)。如血凝作用被抑制（血凝抑制滴度大于l：80為陽(yáng)性），則證實(shí)病料中含有該病毒。
血凝及血凝抑制試驗(yàn)快速、簡(jiǎn)單，成熟且易于推廣，是確診該病的良好方法。因?yàn)槌眉?xì)小病毒外，尚無(wú)類(lèi)似疾病的家兔病料能凝集人O型血紅細(xì)胞，并能被特異性抗體所抑制，因此也可用血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定其抗體效價(jià)，進(jìn)行免疫監(jiān)測(cè)。血凝試驗(yàn)的方法有玻片法、血凝板法、瓷板法。

4．免疫擴(kuò)散法
將病兔肝臟乳劑制備的抗原對(duì)感染兔血清進(jìn)行瓊脂糖免疫擴(kuò)散試驗(yàn)，可檢出特異性抗體。戴康等發(fā)現(xiàn)，以甲醛滅活制備的抗原與抗血清反應(yīng)時(shí)，粗提抗原可出現(xiàn)2～3條沉淀帶，高度提純的抗原則只出現(xiàn)一條沉淀帶。

5．紅細(xì)胞吸附病毒——熒光抗體染色法（直接法）
制備RHD高免血清，按常規(guī)法提取IgG，用F1TC標(biāo)記。用l％人O型血紅細(xì)胞懸液涂片，自然干燥，冷丙酮固定，4~C冰箱保存?zhèn)溆谩２×霞覲BS（10倍，W／V）并勻漿化（1000r／mill，3min），將懸液3000r／mill離心30min，取上清液加于細(xì)胞涂片上，室溫吸附10min，PBS充分沖洗，曬干后加制備的熒光抗體，置37~C濕盒中染色30min，用PBS充分沖洗，蒸餾水沖洗除鹽，干燥后置熒光顯微鏡下觀(guān)察，可見(jiàn)到特異性熒光。

6．Dot-ELISA試驗(yàn)（斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)） 按楊漢春所建立的方法進(jìn)行。
判定標(biāo)準(zhǔn)為：+十為呈深棕色斑點(diǎn)，與強(qiáng)陽(yáng)性相似；十為呈淺棕色斑點(diǎn)，與弱陽(yáng)性相似；一為未呈斑點(diǎn)，與陰性對(duì)照相似。

7．分子生物學(xué)診斷技術(shù)有反轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR） Guttre等以5’末端衣殼蛋白基因?yàn)閷?duì)象設(shè)計(jì)了RT-PCR和套式RTPCR，給果表明此法比ELlSA敏感10‘倍，可以檢出至少12個(gè)拷貝的病毒核酸。

在病毒性出血癥檢測(cè)方面，自1984年以來(lái)相繼建立了一系列抗原、抗體檢測(cè)方法。主要有血凝（HA）和血疑抑制（H”、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（1D）、免疫酶組化法（BA）、ELISA法、熒抗法、斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Dot-ELISA），DNA探針?lè)ǖ取?/p>

雖然上述各種免疫學(xué)檢測(cè)方法在RHDV的檢測(cè)中有一些不可取代的優(yōu)點(diǎn)，但各自仍有不足之處，或因存在不同程度的假陽(yáng)性、假陰性和交叉反應(yīng)，或限于實(shí)驗(yàn)室所需條件，在敏感、特異、簡(jiǎn)便、快速、實(shí)用等特點(diǎn)上均不夠理想。因此，在RHDV的檢測(cè)方面，急需建立符合上述特點(diǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)方法，并結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)等多種診斷方法對(duì)兔病毒性出血癥作出確診。