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致病性試驗鑒定新城疫

閱讀:793          發(fā)布時間:2011-7-1

致病性試驗鑒定新城疫

點擊次數(shù):6 發(fā)布時間:2011-3-12

當采用血凝和血凝抑制將分離到的病毒鑒定為NDV時,并不能確定其暴發(fā)新城疫。根據(jù)OIE的規(guī)定,還必須對分離到的病毒進行毒力測定。評價新城疫病毒的毒力指標有3個,即zui小致死量致死雞胚平均死亡時間(MDT)、1日齡雛雞腦內接種致病指數(shù)(1CPl)和6周齡雛雞靜脈接種致病指數(shù)(1VPl)。

(1)ICPI測定 首先取血凝滴度為2‘以上的新鮮感染雞胚尿囊液,在生物安全柜中用滅菌生理鹽水稀釋10倍;將稀釋好的病毒液用微量一次性注射器腦內接種在隔離器中飼養(yǎng)的1日齡SPF雛雞,每份樣品接種10只,每只接種0.05mi,并設生理鹽水和標準毒株陽性對照。將接種雞在隔離器中隔離飼養(yǎng),每24h觀察一次,連續(xù)觀察8天,每天觀察即應給雞打分,正常雞記作0,病雞記作1,死亡雞記作2(死亡雞在死后每天觀察都記作2)。ICPI是指每只雞8天內所有觀察計分總數(shù)的平均數(shù)。按照下列公式計算其ICPI。
8天累計發(fā)病數(shù)X1+8天累計死亡數(shù)X2

CPI=8天累計發(fā)病數(shù)×1+8天累計死亡數(shù)×2÷8天累計麗熏雞的總數(shù)

ICPl值越大,NDV致病性越強。zui強毒力病毒的ICPI接近2.o,而弱毒株毒力的ICPI值為0。

(2)IVPI測定 在生物安全柜中將血凝滴度為2‘以上的新鮮感染尿囊液,用滅菌生理鹽水稀釋l0倍;翅靜脈接種10只在隔離器中飼養(yǎng)的6周齡SPF小雞,每只0.1ml。并設生理鹽水和標準毒株陽性對照,隔離飼養(yǎng)。每24h對接種的雞觀察一次,連續(xù)觀察l0天,每天觀察應給雞打分,正常雞記作0,病雞記作1,癱瘓雞或有其他神經(jīng)癥狀的記作2,死亡雞記作3(死亡雞在死后的每天觀察都記作3。IVPI是10天內每次觀察每只雞的記錄總數(shù)的平均數(shù)。按照下面列出的公式計算其1VPl。

IVPI= 10天累計發(fā)病數(shù)×1+10天累計癱瘓數(shù)× 2+10天累計死亡數(shù)× 3÷10天累計觀察雞只總數(shù)

IVPI值越大,NDV致病性越強。zui強毒力的病毒的IVPI值可達3.0,弱毒株的IVPI值為0。

(3)MDT測定 在生物安全柜中將新鮮感染尿囊液,用含有青鏈霉素的滅菌生理鹽水稀釋成10-6- 10-9個不同稀釋度,每個稀釋度分別接種5只9-l0日齡SPF雞胚,每只接種o.1ml稀釋好的病毒液;置于孵化器37~C孵育,每天早晚觀察2次,間隔12h,棄去24h之內死亡的雞胚尿囊液。連續(xù)觀察7天,每次觀察都應記錄雞胚死亡的時間。取能夠致死所有雞胚的病毒zui大稀釋倍數(shù)作為該病毒的zui小致死量(MLD)。MDT是指zui小致死量引起雞胚死亡的平均時間。按照下表公式計算其MDT。MDT低于60h為強毒型NDV
MDT值在60—90h為中等毒力型NDV;MDT大于90h為低毒力NDV。

MDT=(Xh死亡胚數(shù)×Xh+YL死亡胚數(shù)×Yh+…)÷死亡胚總
 

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