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免疫印跡技術(shù)和免疫斑點(diǎn)技術(shù)

閱讀:953          發(fā)布時間:2011-6-15

免疫印跡技術(shù)和免疫斑點(diǎn)技術(shù)

點(diǎn)擊次數(shù):264 發(fā)布時間:2009-9-30

免疫印跡技術(shù)又稱Western印跡法,它將凝膠電泳與固相免疫結(jié)合,首先通過蛋白質(zhì)電泳技術(shù)將需要區(qū)分的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固相載體如NC膜等上,再借助酶免疫、放射免疫等技術(shù)進(jìn)行測定。該法能分離分子大小不同的蛋白質(zhì)并確定其分子質(zhì)量,常用于檢測多種病毒抗體或抗原。

免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(dotimmunobindingassay,DIBA)是利用硝酸纖維素膜(NC膜)或乙酸纖維素膜作為固相支持物,進(jìn)行抗原—抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測方法。該法具有微量、快速、經(jīng)濟(jì)、方便等特點(diǎn),可用于檢測抗體或抗原。

免疫斑點(diǎn)技術(shù)的原理是硝酸纖維素膜和醋酸纖維素膜具有很強(qiáng)的靜電吸附力,在中性條件下即可有效地吸附蛋白質(zhì)等生物大分子,因而將抗原吸附于纖維素膜后,就可利用纖維素膜作為固相載體進(jìn)行抗原—抗體反應(yīng)。當(dāng)加入抗體后(即可與膜上的抗原結(jié)合,然后再加入帶有標(biāo)記物的抗體,使標(biāo)記通過抗抗體和相應(yīng)抗體的結(jié)合間接地交聯(lián)于纖維素膜上。加入標(biāo)記物相應(yīng)的底物后,標(biāo)記物即可與底物作用形成不溶性產(chǎn)物,呈現(xiàn)斑點(diǎn)狀著色,從而判定結(jié)果。

根據(jù)所用的標(biāo)記物不同,可分為辣根過氧化物酶免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(使用辣根過氧化物酶作為抗抗體的標(biāo)記物)、堿性磷酸酶免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(使用堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶復(fù)合物作為酶標(biāo)記物)和金銀染色免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(使用膠體金作為抗抗體的標(biāo)記物)等。其中,zui常用的是以辣根過氧化物酶標(biāo)記系統(tǒng)為基礎(chǔ)的免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)。

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