化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
乳膠顆粒凝集試驗（LPAT）檢測與鑒定熱不穩(wěn)定腸毒素
閱讀：983 發(fā)布時間：2011-1-12 由Finkelstein等建立，方法如下。
①乳膠敏化 取lOlL羊抗人源LT-I血清與19Oμl pH8、2甘氨酸緩沖鹽水混勻，再加等體積乳膠制劑，混勻，37℃水浴孵育2h，每15min振搖1次，然后加入用上述緩沖液稀釋的O．1％牛血清白蛋白600uL，3Orain而后即可使用。
②待檢菌液制備 從MacC或EMB或；HE等瓊脂上挑取待檢菌落，在裝有3Ortl的20000U／ml多黏菌素B的Tris-NaCl緩沖液的指形管內(nèi)制成菌懸液，37℃水浴溫育5～3Omin（視菌液濃度而定），離心沉淀細胞，上清液待檢。
③正式試驗 在玻片上加10uL待檢上清和5,aL致敏乳膠，混勻，輕輕搖動3min，在斜射光下觀察結(jié)果，判定標準同一般凝集試驗。如用抗LT全
由Finkelstein等建立，方法如下。
①乳膠敏化 取lOlL羊抗人源LT-I血清與19Oμl pH8、2甘氨酸緩沖鹽水混勻，再加等體積乳膠制劑，混勻，37℃水浴孵育2h，每15min振搖1次，然后加入用上述緩沖液稀釋的O．1％牛血清白蛋白600uL，3Orain而后即可使用。
②待檢菌液制備 從MacC或EMB或；HE等瓊脂上挑取待檢菌落，在裝有3Ortl的20000U／ml多黏菌素B的Tris-NaCl緩沖液的指形管內(nèi)制成菌懸液，37℃水浴溫育5～3Omin（視菌液濃度而定），離心沉淀細胞，上清液待檢。
③正式試驗 在玻片上加10uL待檢上清和5,aL致敏乳膠，混勻，輕輕搖動3min，在斜射光下觀察結(jié)果，判定標準同一般凝集試驗。如用抗LT全血清致敏乳膠，檢測敏感性為印g／m1的LT；若以親和層析純LT抗體敏化乳膠，其靈敏度可達O．O32ug／m1的LT，且無假陽性結(jié)果。本法還能檢測豬源LT-1。Scotland等用這類商品化試劑盒檢測了1OO株大腸桿菌，其結(jié)果與Y1細胞法*吻合。
Honda等已報道用LT抗體致敏的葡萄球菌凝集試驗宋檢測LT，其原理與上法相似。 血清致敏乳膠，檢測敏感性為印g／m1的LT；若以親和層析純LT抗體敏化乳膠，其靈敏度可達O．O32ug／m1的LT，且無假陽性結(jié)果。本法還能檢測豬源LT-1。Scotland等用這類商品化試劑盒檢測了1OO株大腸桿菌，其結(jié)果與Y1細胞法*吻合。
Honda等已報道用LT抗體致敏的葡萄球菌凝集試驗宋檢測LT，其原理與上法相似。