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副溶血性弧菌檢測的免疫學方法
閱讀：763 發(fā)布時間：2011-1-12免疫學方法特異性強、靈敏度高、易于觀察、應(yīng)用廣泛。血清學反應(yīng)是zui基本的免疫學反應(yīng)，主要用于細菌分型。目前，通過血清學反應(yīng)，V．p可分為13種O血清型、71種K血清型。正確的分型為流行病學調(diào)查和臨床用藥提供依據(jù)。但此反應(yīng)只能大概區(qū)分不同地區(qū)和來源的菌株，而且由于抗原位點受環(huán)境等因素的影響易發(fā)生突變，出現(xiàn)新的血清型時，以現(xiàn)有的血清檢測就會漏檢。
目前，應(yīng)用zui廣泛的免疫學方法是酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbentassay，ELISA）。該方法從抗體的包被到酶聯(lián)顯色，都已經(jīng)具備了成熟的技術(shù)，易于制備試劑盒，操作簡單，特異性好，靈敏度高。
由于V．p臨床分離株大多為TDH’株，TRH（thermostable related hemolysin）陽性株只占10％一15％，少數(shù)為TDH和TRH雙陽性，環(huán)境分離株幾乎無TDH+，所以大多研究者主要選擇TDH、TRH為抗原，制備相應(yīng)的抗體進行檢測。ELISA抗體的包被與固定是關(guān)鍵，影響檢測的靈敏度和特異性。Honda等設(shè)計了一種新的固定方法，即用HCl、聚乙烯（p01ythylenceirnine，PEl）、甲基乙烯基馬來酸酐聚合醚（malwie anhydride methylvinyl ether copolymer，MAMEC）等化學試劑處理尼龍膜，接著固定包被TDH和TRH的單克隆抗體，然后與V·p培養(yǎng)肉湯中TDH或TRH反應(yīng)15min，洗滌后，與抗TDH、TRH的兔血清多克隆抗體37℃反應(yīng)15min，再與堿性磷酸酶標記的抗兔抗體IgG反應(yīng)，zui后底物顯色。結(jié)果顯示，經(jīng)過緊密相連的三次抗原抗體反應(yīng)，特異性100％，靈敏度95．15％，并且通過肉眼觀察就能區(qū)分TDH株和TRH株。同時，該尼龍膜也可以直接用于檢測糞便標本，特異性達88．9％，靈敏度達92％，并能在1h內(nèi)完成檢測。此固定方法減少非特異性吸附，增強抗體結(jié)合度，從而增強了特異性，提高了靈敏度。但是，這種方法涉及抗體包被、固定、抗體的標記、顯色等步驟，操作煩瑣，技術(shù)要求高，而且尼龍膜不能長期保存，不能進行大規(guī)模臨床檢測。同時，直接檢測時，抗原量可能不足，抗原位點也容易改變，導致出現(xiàn)新的血清型，如近年來出現(xiàn)新的03：K6血清型，zui終造成漏檢。