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免疫濁度技術(shù)基本原理
閱讀：1078 發(fā)布時(shí)間：2011-1-8 免疫濁度技術(shù)是利用可溶性抗原、抗體在液相中特異結(jié)合，形成一定大小的抗原抗體復(fù)合物，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。當(dāng)反應(yīng)液中保持抗體過剩時(shí)，形成的復(fù)合物隨抗原量增加而增加，反應(yīng)液的濁度亦隨之增加，與一系列的標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，即可計(jì)算出樣品的含量。
免疫濁度分析的光學(xué)基礎(chǔ)是反應(yīng)液中分散粒子對(duì)光的反射、折射、散射（衍射）和吸收等。粒子被光照射后而發(fā)光，這一現(xiàn)象主要取決于粒子的大小、入射光波長及粒徑與波長的比例關(guān)系等等。當(dāng)入射光作用于粒子后向各個(gè)方向發(fā)射光，甚至可繞過粒子發(fā)射光線，稱散射或衍射光。但光照射到膠體溶液后，粒子的光學(xué)現(xiàn)象是復(fù)雜的，濁度法中檢測的光信號(hào)成分主要為散射光或透射光。
免疫濁度測定技術(shù)按照儀器設(shè)計(jì)的不同可以分為兩種，即透射比濁儀測定（turbidimete rmeasure）和散射比濁儀測定（nephelomete rmeasure）。比濁儀測定是測量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰減，其讀數(shù)以吸光度A表示。A反映了入射光與透射光的比率（A＝2一lg10T，T代表濁度百分比）。散射比濁儀測定是測量入射光遇到質(zhì)點(diǎn)（復(fù)合物）后呈一定角度散射的光量，該散射光經(jīng)放大后以散射值表示。
透射光和散射光測定比較
Rayleigh、Debye和Mei等分別對(duì)光散射現(xiàn)象進(jìn)行了系統(tǒng)研究，認(rèn)為光散射強(qiáng)度10）與入射光強(qiáng)度（Iθ）的關(guān)系符合下述公式：
Iθ＝Io×8π4×N×α2（1＋COS2θ）／γ2×入2。
亦可表示如下：
Iθ＝Io ×（24π3／λ4）×N×γ2×[（n2-n02）／（n2+2n02）]×（1+COS2θ）。
式中入和I0分別表示入射光的波長和強(qiáng)度，θ表示光信號(hào)檢測器與入射光之間的夾角，Iθ表示與入射光束成θ角度處散射光的強(qiáng)度，r表示微粒分子至檢測器的距離，α表示分子極化率，N表示每單位容積分子數(shù)目，n和n。分別為粒子和溶劑的折射率。
在免疫化學(xué)反應(yīng)中，可溶性抗原與抗體反應(yīng)，形成免疫復(fù)合物，反應(yīng)系統(tǒng)中的粒子由小變大，相應(yīng)地也會(huì)出現(xiàn)散射光強(qiáng)度隨角度而變的情況。因此上述理論為免疫濁度法的研究、儀器和試劑的設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化及臨床應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。