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技術(shù)文章

α2巨球蛋白(α2M) 的測定

閱讀:806          發(fā)布時間:2010-12-23

  α2巨球蛋白(α2-macroslobulin,α2M)是血清中有重要生物學(xué)活性的大分子糖蛋白,分子量725kD。主要由肝臟合成,骨骼肌也能合成,半壽期約10d。α2M是一種廣譜蛋白酶抑制劑,可與多種肽鏈內(nèi)切酶形成不可逆性復(fù)合物,是纖溶酶的主要抑制物,在維持出、凝血平衡上具有重要作用。它除具有抗放射損傷作用外,尚可參與免疫調(diào)控。業(yè)已證實,α2M在體內(nèi)外能抑制多種免疫反應(yīng),與慢性肝、腎疾病的關(guān)系較為密切。因為血清中α2M含量較高,故用單向免疫擴散法、火箭電泳法、速率散射濁度法等即可檢測。在純化α2M的基礎(chǔ)上,制備α2MMcAb,建立敏感性、特異性及度較高的ELISA法,可以檢測含量很低的尿液中的α2M?,F(xiàn)介紹雙抗體夾心ELISA法檢測尿中a2M。

 
    1.試劑  α2M的制備:取抗凝血漿1份加0.02mol/LpH7.4PBS2份,于攪拌下緩慢滴加50%PEG 6 000,使PEG的zui終濃度為4%,攪拌15rain后,離心棄上清。沉淀用生理鹽水溶解后過Sepharose 4B-抗人a2MMcAb親和層析柱,充分洗脫后,用3mol/LKCNS解吸附,解離液用生理鹽水透析后再過Sepharose4B-抗人IgC柱,吸附殘留的IgG,收集穿流液,濃縮后鑒定.
 
    2.操作步驟  按雙抗體夾心ELISA法四步程序進行。即用抗人a2MMcAb包被微孔板,4℃過夜,取出洗滌;加入用PBS 1:2稀釋的尿液標(biāo)本,37℃ 2h,洗滌;加入羊抗人α2M多克隆抗體,37~C 2h,洗滌;加入HRP標(biāo)記的兔抗羊IsC,孵育后加入底物呈色。終止反應(yīng)后在酶標(biāo)儀上讀取492nm波長的吸光度值。按常規(guī)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,算出待測血a2M含量。
 
    3.正常值范圍與臨床意義  免疫擴散法測得正常男性血清a2M為1.5~3.5z/L,女性為1.35~4.2g/L。2—4歲兒童血清a2M約為成人的2~3倍。更年期婦女血清e2M含量也較高。ELBA法檢測正常人尿液中Q,M含量均低于0.026mg/L。
 
    慢性活動性肝炎,肝硬化,急、慢性腎炎,腎病綜合征,糖尿病,惡性腫瘤,活動性結(jié)締組織病等患者的血清a2M含量升高。此外,妊娠、服用避孕藥物時02M含量也升高。在流行性出血熱和肝炎全過程中,發(fā)現(xiàn)疾病進展時a2M升高,進入恢復(fù)階段則降至正常水平,動態(tài)觀察a2M變化可作為病情判斷的指標(biāo)。直接測定尿中02M含量,可對腎臟的早期損害提供有價值的輔助診斷。

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