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技術文章

RNA操作指南

閱讀:819          發(fā)布時間:2010-12-9

RNA抽提純化是分子生物學研究的基本工作內容。但是由于RNA酶(RNase)的廣泛存在和難以滅活的特性,使RNA的抽提純化和后續(xù)工作十分困難。即使Trizol試劑和各類RNA抽提純化試劑盒的廣泛應用使RNA抽提和純化變得方便快捷,但是涉及RNA的工作仍然是分子生物學研究中zui讓人棘手的。為了保證您的工作成功,請仔細閱讀本操作指南,相信它能幫助您解決常見的問題。

總而言之,RNA工作順利與否的關鍵是防止RNA酶的污染。RNase無處不在,在實驗操作的任何一步,任何偶然的疏忽或不妥當?shù)牟僮鞫加锌赡茉斐蒖Nase的污染,從而導致整個實驗的失敗。因此,嚴格控制實驗條件,避免任何可能的污染,是保證實驗成功的先決條件。為此,必須作到以下幾點:

  • 盡可能在實驗室專門辟出RNA操作區(qū),離心機、移液器、試劑等均應。RNA操作區(qū)應保持清潔,并定期進行除菌。
  • 操作過程中應始終戴一次性橡膠手套,并經常更換,以防止手、臂上的細菌和真菌以及人體自身分泌的RNase帶入各種容器內或污染用具。盡量避免使用一次性塑料手套。塑料手套不僅常常給操作帶來不便,而且塑料手套的多出部分常常將器具有RNase處傳遞到RNase-free處,擴大污染。
  • 盡量使用一次性的塑料制品,避免共用器具如濾紙、tips、tubes等,以防交叉污染。例如,從事RNA探針工作的研究者經常使用RNase H、T1等,在操作過程中極有可能造成移液器、離心機等的污染。而這些污染了的器具是RNA操作的大敵。
  • 配制溶液用的乙醇、異丙醇、Tris等應采用未開封的新瓶裝試劑。
  • 關于一次性塑料制品,建議使用廠家供應的出廠前已經滅菌的tips和tubes等。多數(shù)廠家供應的無菌塑料制品很少有RNase污染,買來后可直接用于RNA操作。用DEPC等處理的塑料制品,往往由于二次污染而帶有RNase,從而導致實驗失敗。
  • 所有玻璃器具都必須在150℃烘烤4小時。
  • 如果您需要長期儲藏或運輸RNA樣品,請將您的RNA樣品溶解在Sangon提供的RNApro中,它可以在常溫下保證您的RNA樣品在一年內不會發(fā)生降解。

無法用DEPC處理的用具可用氯仿擦拭若干次,這樣通??梢韵齊Nase的活性。

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