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   在大多數(shù)噬菌體展示載體中，抗體片段的表達(dá)是由lacZ啟動(dòng)子啟動(dòng)的。盡管這個(gè)啟動(dòng)子存在某些漏洞并可以優(yōu)化，但以以下一些指導(dǎo)進(jìn)行操作，其效果依然良好。在噬菌體救援前，含有抗體文庫(kù)的細(xì)菌在葡萄糖存在的條件下，可生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期。葡萄糖可抑制lacZ啟動(dòng)子的活性，因此使pⅢ和抗體表達(dá)都下降。這就有兩點(diǎn)重要作用：一是由于pⅢ和抗體產(chǎn)生的毒性下降，防止了文庫(kù)的偏性發(fā)生；二是抑制了pⅢ表達(dá)就可允許細(xì)菌纖毛表達(dá)，從而使輔助噬菌體能進(jìn)行感染。如果沒(méi)有葡萄糖，感染效率會(huì)急劇下降，結(jié)果大大降低了抗體文庫(kù)的有效容量：輔助噬菌體感染后，則須去除葡萄糖，以便讓pⅢ和抗體進(jìn)行表達(dá)。而后，低水平lacZ啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)pⅢ表達(dá)，但這已足以進(jìn)行有效的展示了。用異丙基硫代半乳糖苷（1PTG）誘導(dǎo)啟動(dòng)子達(dá)不到預(yù)期效果，反而大大降低了展示水平。這是由pⅢ和抗體融合蛋白的毒性及pⅢ抗體融合蛋白的降解所致。對(duì)于scFv文庫(kù)和Fab文庫(kù)，過(guò)夜生長(zhǎng)階段的典型溫度是30℃；此溫度下，抗體展示水平似乎更佳。選擇前，先用PEG沉淀法從培養(yǎng)基上清中制備噬菌體。這樣就可以去除不*抑制或蛋白水解切除所產(chǎn)生的抗體片段。這些抗體片段能與噬菌體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。PEG沉淀也可以去除其他任何能干擾選擇的污染物。如果計(jì)劃長(zhǎng)期保存噬菌體，推薦接著進(jìn)行氯化銫離心純化。

 

    自抗體文庫(kù)儲(chǔ)存料中制備噬菌體。在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，先用滴定法（在TYE/amp/glu平板上系列稀釋鋪板）計(jì)算每毫升抗體文庫(kù)儲(chǔ)存料中細(xì)菌的數(shù)目。在600nm（A600）處的某個(gè)特定吸光值下，抗體文庫(kù)中細(xì)菌數(shù)目較未感染細(xì)菌數(shù)目低一些。這或許是因?yàn)楹匈|(zhì)粒的文庫(kù)細(xì)菌體積更大，或者是存在死細(xì)菌。一旦滴度與A600確定關(guān)系，吸光值即可用于細(xì)菌數(shù)目的計(jì)算。對(duì)于噬菌體的制備（文庫(kù)救援），來(lái)自文庫(kù)儲(chǔ)存料的起始接種量應(yīng)比文庫(kù)容量大5倍。接種到培養(yǎng)基后，細(xì)菌濃度的A600不應(yīng)超過(guò)0．05。采用文庫(kù)容量5倍以上的細(xì)菌接種以確保它能呈現(xiàn)出文庫(kù)中的所有成員。而培養(yǎng)起始的A₆₀₀小于0．05，則可以確保輔助噬菌體加入前處于多倍增長(zhǎng)期，以提高輔助噬菌體感染的有效性。用于救援的zui小培養(yǎng)體積必須根據(jù)文庫(kù)容量和0．05的zui大起始A600值來(lái)確定。例如，含有1．0×l0¹⁰個(gè)成員的抗體文庫(kù)所需要的起始接種量為5．0×l0^l0個(gè)細(xì)菌。因?yàn)?．0A₆₀₀＝1．0×10⁹，為保證起始培養(yǎng)液A600值小于0．05，則需要1L的培養(yǎng)體積。此體積的培養(yǎng)液應(yīng)平均分到兩個(gè)含有250ml 2×TY/amp/glu培養(yǎng)基的2L錐形瓶中。葡萄糖會(huì)抑制pⅢ的表達(dá)，但允許纖毛的表達(dá)。

 

    使用新鮮制備的噬菌體才會(huì)得到*選擇結(jié)果。這是因?yàn)榧幢阍?80℃下保存，展示抗體也會(huì)隨時(shí)間的推移而出現(xiàn)緩慢的蛋白水解。應(yīng)用氯化銫梯度離心法純化菌體，能顯著降低蛋白的水解。這樣純化后，蛋白質(zhì)會(huì)非常穩(wěn)定。預(yù)期產(chǎn)量是每毫升原始培養(yǎng)液產(chǎn)生（1～5）×10^1l個(gè)噬菌體，而氯化銫純化后產(chǎn)量會(huì)下降50％。