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競爭分析作圖法實驗原理
閱讀：845 發(fā)布時間：2010-11-24確定2種單克隆抗體是否結(jié)合蛋白質(zhì)抗原上同一位點的zui簡便的方法是競爭分析法。該方法可確定一種抗體是否對另一種抗體與某一位點的結(jié)合具有抑制作用。如果兩者相互競爭，說明2種抗體識別相同位點或同一蛋白質(zhì)的空間折疊結(jié)構(gòu)域。相反，如果2種抗體與抗原結(jié)合無相互競爭抑制作用，能夠同時與抗原結(jié)合，說明2種抗體具有不同的特異性，所識別的抗原表位也不同）。
競爭試驗
競爭分析法對單克隆抗體的特異性分析zui為有用，而多克隆抗血清可識別多種不同的位點，故不宜用此法分析。檢測抗原與抗體間相互競爭結(jié)合試驗的方法較多，但其中至少必須應(yīng)有一種抗體被直接標(biāo)記，同時對抗體所結(jié)合的抗原經(jīng)過純化。其中ElISA方法zui常用，檢測用的抗體可用生物素化標(biāo)記（Wagener等1984）。在Wagener的試驗中，主要是為了檢測2個新的單克隆抗體XHl和XH2，與已知的抗YFPl抗體ZO-1競爭結(jié)合目的抗原YFPl。首先，將抗原蛋白質(zhì)YFPl包被96孔酶標(biāo)板，直接測定以確定所有抗體是否具有活性，并均能與包被抗原進(jìn)行反應(yīng)。還必須事先測定抗體的滴度，以確定競爭試驗的zui敏感條件。隨后還應(yīng)檢測未標(biāo)記的抗體XHl、XH2和ZO-1分別與生物素標(biāo)記的ZO-1競爭性與抗原YFPl結(jié)合的能力。