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5種磺胺類藥物殘留的液相色譜法
閱讀：674 發(fā)布時間：2010-10-26（1）試劑和材料 除特別注明外，所用試劑均為分析純；水為超純水。
①磺胺類藥物對照晶（SMM、SDM、SMz、SMZ和SQ）
②甲醇 色譜純
③乙腈 色譜純
④正己烷
⑤正丙醇
⑥無水硫酸鈉
⑦堿性氧化鋁SPE柱 每根柱填料量為28
⑧磺胺類藥物貯備液（1mg／mi） 分別取上述磺胺類藥物對照晶各約50mg，精密稱定，置同一50ml量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。置一20~C以下冰箱中保存，有效期3個月。
⑨磺胺類藥物工作液（5Ps／mi） 精密量取磺胺類藥物貯備液o．5ml，置100ml量瓶，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。置一20~C以下冰箱中保存，有效期1個月。
⑩磺胺類藥物對照溶液 取磺胺類藥物工作液用流動相稀釋成濃度為o．02gg／ml、0．05Pe／mI、0．1P8／ml、0．2Pg／m1、0．5Pz／ml、1．0鵬／ml的系列對照溶液。置2—8~C冰箱中保存，有效期I周。
（2）儀器和設(shè)備
①液相色譜儀
②離心機(jī)
③固相萃取裝置（配考克閥
④分析天平 精度0．0001g
⑤天平 精度0.0lg
⑥旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀
⑦振蕩器
⑧勻漿機(jī)
⑨渦動混合器
⑩分液漏斗 50ml
@梨形瓶 lOOml
⑩離心管50ml
⑩微孔濾膜 0．45um
（3）測定步驟
①提取和凈化 稱取組織樣品5g（到0．1g），加入乙腈25ml，無水硫酸鈉4g，以10000r／min以上的速度均質(zhì)lmin后，以3000r／ITIIB的速度離心5min。分離后的殘渣再用25ml乙腈處理，振蕩10min后，以3000r／min的速度離心5min。合并兩次的上清液，加入正己烷30ml，振蕩l0min，靜置分層后，取下層液體，加10mi正丙醇；500c下減壓干燥，殘留物用95％乙腈共4m1分兩次溶解，過Sep—Pek氧化鋁B柱。用95％乙腈5ml過柱，不收集，真空抽干（整個過程控制堿性氧化鋁SPE柱流速在l～2ml／min）。再用70％乙腈l0ml洗脫后，洗脫液中加入5ml正丙醇，500c下減壓干燥后，殘留物用2．0mi流動相溶解，用o．45um濾膜過濾，轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣小瓶中，待測。
②測定
a色譜條件
色譜柱：Cis柱，g50mmX4．6mm（內(nèi)徑），粒徑5um或相當(dāng)者
流動相：乙腈—甲醇—水—乙酸（2+2+9+0．2）
流速；lml／mill
檢測波長：270nm
進(jìn)樣量：20uL
b．測定 根據(jù)樣液中磺胺類藥物含量情況，選定峰面積相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液。溶液及試樣溶液中磺胺類藥物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)，試樣溶液測定過程中應(yīng)參插注入對照溶液，以便準(zhǔn)確定量。
③空白試驗 除不加試樣外，按上述測定步驟進(jìn)行。
（4）靈敏度和回收率
本方法的檢測限為50ug／kg。
在100ug／kg添加濃度水平上，回收率范圍為50％一110％