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北京迪科馬科技有限公司(迪馬科技)

花生油和糧谷中黃曲霉毒素的檢測(cè)——UPLC-MS/MS法

時(shí)間:2016-9-9 閱讀:5131
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黃曲霉毒素包括B1、B2、G1、G2、M1、M2等多種形式,但是目前有關(guān)這些毒素的檢測(cè)方法很少,且以酶聯(lián)免疫(ELISA)法和薄層色譜(TLC)法等篩選方法檢測(cè)黃曲霉毒素B1為主;液相色譜法(HPLC)容易受到雜質(zhì)干擾,而且檢出限很難達(dá)到要求。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)是一種集分離和多組分定性、定量于一體的系統(tǒng),已成為近年來(lái)研究黃曲霉毒素檢測(cè)的主要方向,并已經(jīng)應(yīng)用到黃曲霉毒素的污染檢測(cè)中。

方法優(yōu)勢(shì):

迪馬科技開(kāi)發(fā)的《花生油和糧谷中黃曲霉毒素的檢測(cè)-UPLC-MS/MS法》采用固相萃取-UPLC-MS/MS法,可同時(shí)檢測(cè)5種黃曲霉毒素,并能夠達(dá)到準(zhǔn)確定性定量,檢出限是0.5 μg/kg,遠(yuǎn)低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB 2761-2011 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素*》;對(duì)比國(guó)標(biāo)方法《GB/T 18979-2003 食品中黃曲霉毒素的測(cè)定 免疫親和層析凈化液相色譜法和熒光光度法》,本方案具有:

  1. 前處理步驟簡(jiǎn)單、回收率高、方法穩(wěn)定性好、凈化效果優(yōu)異等特點(diǎn);

  2. 避免了免疫親和柱容易受環(huán)境影響而引起黃曲霉毒素回收率低和凈化效果不好的弊端,保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性;

  3. 過(guò)柱方法簡(jiǎn)單易操作,對(duì)操作人員要求不高,檢測(cè)成本相對(duì)較低,能被很多企事業(yè)單位采用。

以下為詳細(xì)解決方案,敬請(qǐng)參考!

花生油和糧谷中黃曲霉毒素的檢測(cè)——UPLC-MS/MS法

1、適用范圍

本方案適用于花生油、小米、高粱、糙米等樣品中黃曲霉毒素的檢測(cè)。本方案定量限是0.5 μg/kg。

2、提取

稱取2.0 g 樣品,加入8 mL 85%乙腈水,振蕩2 min,超聲10 min,6000 rpm離心2 min,收集上清液,待凈化。

3、凈化——ProElut AFT-3 12 mL(Cat#:65915)

將待凈化液加入柱中,收集2 mL流出液,在50 ℃水浴下減壓蒸干,用初始流動(dòng)相定容到1 mL,過(guò)膜上機(jī)分析。

4、分析條件

4.1 UPLC 條件:

色譜柱:Leapsil C18,100 × 2.1 mm,2.7 μm (Cat#:86005)

流  速:0.3 mL/min   

進(jìn)樣量:5 μL  

柱  溫:40 ℃

流動(dòng)相:乙腈:0.1% 甲酸水

梯度

時(shí)間(min)

0

6

7

15

乙腈(%)

30

70

30

30

0.1% 甲酸水(%)

70

30

70

70

4.2質(zhì)譜條件:

電離模式:ESI

掃描方式:正離子掃描

檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)

電噴霧電壓:5500 V

霧化氣壓力:50 psi

輔助氣壓力:50 psi

氣簾氣壓力:20 psi

離子源溫度:500 ℃

定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、碰撞氣能量及去簇電壓見(jiàn)下表

藥物名稱

定性離子對(duì)

(m/z)

(母離子/子離子)

定量離子對(duì)

(m/z)

(母離子/子離子)

碰撞氣能量/eV

去簇電壓/V

AFB1

313.0/241.0

313.0/241.0

51

78

313.0/285.0

51

AFB2

315.0/259.0

315.0/259.0

40

77

315.0/287.0

40

AFG1

329.0/200.0

329.0/200.0

56

74

329.0/243.0

56

AFG2

331.0/189.0

331.0/189.0

60

61

331.0/313.0

60

AFM1

329.0/273.0

329.0/273.0

40

64

329.0/243.0

40

5、添加回收結(jié)果

糧谷及油類樣品中黃曲霉毒素檢測(cè)(添加水平10 μg/kg)的添加回收結(jié)果(%)

基質(zhì)

AFB1

AFB2

AFG1

AFG2

AFM1

花生油

94.0

102.4

106.6

93.2

96.2

糙米

96.0

99.2

87.2

108.4

87.6

高粱

94.4

93.8

86.4

95.0

92.6

小米

96.8

90.6

112.8

91.4

89.0

 

1.jpg

5種黃曲霉毒素10 μg/L MRM色譜圖

 2.jpg

黃曲霉毒素B1 10 μg/L XIC色譜圖

3.jpg

黃曲霉毒素B2 10 μg/L XIC色譜圖

 4.jpg

黃曲霉毒素G1 10 μg/L XIC色譜圖

 5.jpg

黃曲霉毒素G2 10 μg/L XIC色譜圖

 6.jpg

黃曲霉毒素M1 10 μg/L XIC色譜圖

花生油和糧谷中黃曲霉毒素檢測(cè)—UPLC-MS/MS法相關(guān)產(chǎn)品信息:

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

樣品前處理

65915

ProElut AFT-3

12 mL, 20/pk

244358

12管防交叉污染真空SPE萃取裝置

12位

4806

考克(控制流量)

15/pk

99011

真空/正壓兩用泵,無(wú)油

1/pk

99013

抽濾瓶套裝

(包括硅橡膠管2米,2L抽濾瓶及橡膠塞)

1/pk

30039

FitMax針頭式過(guò)濾器 Nylon

13 mm,0.22 μm 100/pk

30040

FitMax針頭式過(guò)濾器 Nylon

13 mm,0.45 μm 100/pk

標(biāo)準(zhǔn)品

82O-S02017-1ML

黃曲霉毒素B1(AFB1) [1162-65-8]

2 μg/mL溶于乙腈, 1 mL

82O-S02018-1ML

黃曲霉毒素B2(AFB2) [7220-81-7]

0.5 μg/mL溶于乙腈,1 mL

82O-S02019-1ML

黃曲霉毒素G1(AFG1) [1165-39-5]

2 μg/mL溶于乙腈, 1 mL

82O-S02020-1ML

黃曲霉毒素G2(AFG2) [7241-98-7]

0.5 μg/mL溶于乙腈,1 mL

82O-S02030-1ML

黃曲霉毒素M1(AFM1) [6795-23-9]

0.5 μg/mL溶于乙腈,1 mL

色譜柱及保護(hù)柱

86005

Leapsil C18 2.7 μm UHPLC/HPLC

兼容反相色譜柱

100×2.1 mm,2.7 μm

HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對(duì)試劑

50101

乙腈  HPLC級(jí)

4 L

50144

甲酸  HPLC級(jí)

50 mL

通用色譜產(chǎn)品

52401B

瓶架/藍(lán)色(現(xiàn)貨)

50孔

52401A

瓶架/白色(現(xiàn)貨)

50孔

1034

樣品瓶(棕色/螺紋)

2 mL, 100/pk

1035

樣品瓶蓋/含墊(已經(jīng)組裝)

100/pk

H80465

HPLC 進(jìn)樣針

25 μL

紅色產(chǎn)品貨號(hào)#30039、#30040、#1034、#1035*

 

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