國內(nèi)國外檢測利什曼原蟲（黑熱病）檢測方法對比

國內(nèi)黑熱病的診斷方法

間接熒光抗體試驗(IFAT)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、直接凝集試驗(DAT)、間接血球凝集試驗(IHA)、對流免疫電泳(CIE)、重組抗原(rK39)試紙條、酶聯(lián)免疫印漬技術(shù)等。

國內(nèi)外一致認(rèn)為IFAT是診斷黑熱病較敏感的一種方法，李國茹等用IFAT共檢查l9例病人，其中l(wèi)0例骨位穿刺確診的現(xiàn)癥病人均為陽性(1：160～1：10 240)，5例疑似病人亦陽性(1：4～1：5 120)，經(jīng)銻劑治療后*，說明IFAT 可較早發(fā)現(xiàn)病人，能及時和準(zhǔn)確地反映疫區(qū)人群中黑熱病的流行現(xiàn)狀。

而ELISA則是一種比較快速的檢測方法，王秀珍等建立的快速ELISA法，對37例臨床癥狀疑似黑熱病者，同時作骨滋穿刺和耳垂采血作快速ELISA，二者陽性符合率100%，其中3例骨穿陰性，快速ELISA陽性的病人，經(jīng)再次作骨穿和復(fù)查原骨翻片均查見利杜體。這不僅為有臨床癥狀而骨穿陰性者提供較可靠的輔助診斷．而且可用于現(xiàn)場進(jìn)行傳染源監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查。

為了檢測更加方便，一些學(xué)者研發(fā)了試紙條。2005年李國茹等通過rK39試紙條與病原學(xué)兩種診斷黑熱病方法的比較，判斷rK39試紙條檢測黑熱病的可靠性，結(jié)果顯示應(yīng)用rK39試紙條診斷黑熱病現(xiàn)癥患者的陽性檢出率可達(dá)96.07% ，與病原學(xué)方法相比，檢出率明顯提高(P<0．01)。

利用IFAT和ELISA方法檢測具有較高的臨床價值，但這兩種方法常和某些疾病存在交叉反應(yīng)，故使用上有一定的局限性。鮑勇等利用免疫印漬技術(shù)分析杜氏利什曼前鞭毛體蛋白分子量，并用其蛋白帶分別和黑熱病人血清及其他血清進(jìn)行酶聯(lián)免疫印漬試驗，結(jié)果顯示63ku的特異性和靈敏度都非常高，僅和麻風(fēng)病人有輕度交叉反應(yīng)，這證明63ku是杜氏利什曼前鞭毛體特異性抗原，該診斷方法較簡單，結(jié)果較可靠，和麻風(fēng)病人的輕度交叉反應(yīng)易從臨床上予以區(qū)別。有學(xué)者認(rèn)為39ku也是杜氏利什曼前鞭毛體特異性抗原，胡孝素等對健康人、非黑熱病病人和11例確診黑熱病病人的血清進(jìn)行不同程度的稀釋，并將表達(dá)杜氏利什曼原蟲39ku抗原的大腸埃希菌稀釋到達(dá)1：400時，全部黑熱病患者的血清均能識別重組杜氏利什曼原蟲39ku抗原，具有臨床診斷價值 。

國外黑熱病的診斷方法
尿樣直接凝集試驗、免沉淀試驗、蒸餾水試驗，醛凝試驗和尿斯銻巴明試驗、制動試驗等。以往診斷黑熱病的方法是血清直接凝集試驗和尿樣酶聯(lián)免疫吸附試驗.

在英國Islain M Z等研究中介紹它們的敏感度分別為91.0% ，93.3%，EI ISA特異度為97.3%。Islam MZ與日本Aichi醫(yī)科大學(xué)寄生蟲學(xué)教研室及其他幾個大學(xué)共同研制出一種新型的以尿樣為標(biāo)本的直接凝集試驗，結(jié)果顯示，ELISA及尿樣凝集試驗的特異度無顯著性差異，由于該法與以往的血清直接凝集試驗和尿樣酶聯(lián)免疫吸附試驗相比，在檢測條件上具有簡便易行、無創(chuàng)傷等諸多*性，而且省去了ELISA所需的儀器設(shè)備，因此，對于診斷黑熱病尤其是野外診斷具有非常重要的意義。
 

Another method commonly used to detect kala-azar is immunoprecipitation. French scholars have widely used human and canine surveys in the Mediterranean coastal areas where black fever is common. According to their research, the positive rate of precipitation reaction is 64% to 95% in cases diagnosed as kala-azar. The aldosterone test is also a simple and rapid method for diagnosing kala-azar. The method is to add 1 drop of acetaldehyde formalin to the patient's 1 mL serum, and the white gel appears in a few minutes as a positive reaction. The positive reaction disappears after the disease is cured, and the cause of the disappearance is closely related to the decrease of the globulin titer. This test is non-specific or weakly specific, because high-gamma globulin anemia caused by other causes is also often positive, so it is not recommended to use this method to diagnose kala-azar.

Some people in foreign countries have also applied the brake test to detect kala-azar. Some scholars have reported that brake antibodies are contained in the serum of cutaneous leishman patients. However, this report is questionable because a complement was added to their trial, and a component of this complement is likely to be a thermal instability in the normal serum that prevents the Leishmania promastigotus from moving. factor. Therefore, this kind of experiment has not been widely used at present.

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