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技術(shù)文章
熒光定量PCR儀技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用（二）
閱讀：2836 發(fā)布時(shí)間：2010-4-223 在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用
3．1 病原體測定
PCR技術(shù)的問世使病原體檢測能夠快速、方便地進(jìn)行。由于PCR技術(shù)假陽性率太高，只要有微量病原體存在就可得到陽性結(jié)果，這并不能作為診斷依據(jù)， 只有當(dāng)一定數(shù)量的病原體存在時(shí)才有臨床意義。因此，對模板準(zhǔn)確定量顯得特別重要，應(yīng)用熒光技術(shù)PCR儀就能夠快速、準(zhǔn)確地得到結(jié)果。對于解決免疫學(xué)檢測的“窗口期”問題，判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)，以及抗體檢測不能判定是現(xiàn)癥感染還是既往感染時(shí)，均可利用PCR進(jìn)行確定。
一些研究資料表明，病原體感染后的發(fā)病時(shí)間，病情輕重及預(yù)后往往與病原體數(shù)量相關(guān)。如HIV感染后，潛伏期長短、臨床癥狀輕重與血液中病毒量顯著相關(guān)，甚至可根據(jù)HIV的量比較準(zhǔn)確地預(yù)測發(fā)病時(shí)I 。在研究其他病毒感染性疾病是否有類似情況，病原體的致畸和致突變作用是否與病原體的量等有關(guān)問題時(shí)，也可利用FQ—PCR來闡明。另據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，病毒的數(shù)量與某些藥物的療效相關(guān)。例如，干擾素對肝炎病毒高拷貝者不敏感，對低拷貝者敏感。因此利用FQ—PCR對某些病毒的定量分析可指導(dǎo)臨床用藥和制定治療方案。
3.2 腫瘤研究
盡管腫瘤發(fā)病的分子機(jī)制尚未*闡明，但相關(guān)基因的遺傳學(xué)改變的積累是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因已得到普遍承認(rèn)。癌基因的表達(dá)增加和突變在許多腫瘤早期和良性階段就可出現(xiàn)，F(xiàn)Q—PCR 不但能有效地檢測基因的突變，而且能準(zhǔn)確測定表達(dá)量，據(jù)此進(jìn)行腫瘤早期診斷、分型、分期和預(yù)后判斷。某些癌基因的遺傳學(xué)變化的檢測幾乎達(dá)到確診腫瘤的程度。例如，CD 基因的異常拼接表達(dá)，幾乎只有出現(xiàn)于某些泌系腫瘤。對于有慢性骨髓性白血病都可檢測到原癌基因易位導(dǎo)致的BCR／ABL融合基因形成，F(xiàn)Q—PCR技術(shù)不但可通過檢測BCR／ABL融合基因的表達(dá)而進(jìn)行腫瘤診斷，還可檢測治療中和治療后
微量殘余惡性細(xì)胞存在的數(shù)量，以此作為治療效果
和估計(jì)復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性的依據(jù)。
3．3 其他方面
在基因表達(dá)研究中， 由于FQ—CPR的應(yīng)用，對mRNA的檢測顯得較以前常用的方法， 如Northem印跡、RT—PCR定量法要方便、快速、準(zhǔn)確得多。在免疫組分析中，對免疫T細(xì)胞群體V—p組織進(jìn)行分析是研究健康和疾病免疫應(yīng)答反應(yīng)的重要手段。利用FQ—PCR技術(shù)進(jìn)行分析，克服了原來分析方法如流式細(xì)胞法、競爭性PCR技術(shù)等操作復(fù)雜，準(zhǔn)確性低，污染嚴(yán)重的缺點(diǎn)。
4 結(jié)語
綜上所述，F(xiàn)Q—PCR作為一種核酸定量技術(shù)，在以前的PCR技術(shù)上得到進(jìn)一步發(fā)展，大大降低了假陽性率，工作效率高，結(jié)果重現(xiàn)性好，且不必使用對人體有害的染色劑。FQ—PCR應(yīng)用較多且較成熟主要是在病原體檢測方面，其*性在此也得以充分體現(xiàn)。因此將其應(yīng)用于臨床具有很大潛力。在腫瘤、遺傳病研究，尤其
是基因表達(dá)方面的研究，該技術(shù)應(yīng)用還較少，在這方面加強(qiáng)研究應(yīng)用，將會有廣闊的前景。將生物基因芯片技術(shù)與FQ—PCR技術(shù)結(jié)合，有助于PCR技術(shù)的進(jìn)一步完善，推動該技術(shù)的發(fā)展、應(yīng)用。
3．1 病原體測定
PCR技術(shù)的問世使病原體檢測能夠快速、方便地進(jìn)行。由于PCR技術(shù)假陽性率太高，只要有微量病原體存在就可得到陽性結(jié)果，這并不能作為診斷依據(jù)， 只有當(dāng)一定數(shù)量的病原體存在時(shí)才有臨床意義。因此，對模板準(zhǔn)確定量顯得特別重要，應(yīng)用熒光技術(shù)PCR儀就能夠快速、準(zhǔn)確地得到結(jié)果。對于解決免疫學(xué)檢測的“窗口期”問題，判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)，以及抗體檢測不能判定是現(xiàn)癥感染還是既往感染時(shí)，均可利用PCR進(jìn)行確定。
一些研究資料表明，病原體感染后的發(fā)病時(shí)間，病情輕重及預(yù)后往往與病原體數(shù)量相關(guān)。如HIV感染后，潛伏期長短、臨床癥狀輕重與血液中病毒量顯著相關(guān)，甚至可根據(jù)HIV的量比較準(zhǔn)確地預(yù)測發(fā)病時(shí)I 。在研究其他病毒感染性疾病是否有類似情況，病原體的致畸和致突變作用是否與病原體的量等有關(guān)問題時(shí)，也可利用FQ—PCR來闡明。另據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，病毒的數(shù)量與某些藥物的療效相關(guān)。例如，干擾素對肝炎病毒高拷貝者不敏感，對低拷貝者敏感。因此利用FQ—PCR對某些病毒的定量分析可指導(dǎo)臨床用藥和制定治療方案。
3.2 腫瘤研究
盡管腫瘤發(fā)病的分子機(jī)制尚未*闡明，但相關(guān)基因的遺傳學(xué)改變的積累是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因已得到普遍承認(rèn)。癌基因的表達(dá)增加和突變在許多腫瘤早期和良性階段就可出現(xiàn)，F(xiàn)Q—PCR 不但能有效地檢測基因的突變，而且能準(zhǔn)確測定表達(dá)量，據(jù)此進(jìn)行腫瘤早期診斷、分型、分期和預(yù)后判斷。某些癌基因的遺傳學(xué)變化的檢測幾乎達(dá)到確診腫瘤的程度。例如，CD 基因的異常拼接表達(dá)，幾乎只有出現(xiàn)于某些泌系腫瘤。對于有慢性骨髓性白血病都可檢測到原癌基因易位導(dǎo)致的BCR／ABL融合基因形成，F(xiàn)Q—PCR技術(shù)不但可通過檢測BCR／ABL融合基因的表達(dá)而進(jìn)行腫瘤診斷，還可檢測治療中和治療后
微量殘余惡性細(xì)胞存在的數(shù)量，以此作為治療效果
和估計(jì)復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性的依據(jù)。
3．3 其他方面
在基因表達(dá)研究中， 由于FQ—CPR的應(yīng)用，對mRNA的檢測顯得較以前常用的方法， 如Northem印跡、RT—PCR定量法要方便、快速、準(zhǔn)確得多。在免疫組分析中，對免疫T細(xì)胞群體V—p組織進(jìn)行分析是研究健康和疾病免疫應(yīng)答反應(yīng)的重要手段。利用FQ—PCR技術(shù)進(jìn)行分析，克服了原來分析方法如流式細(xì)胞法、競爭性PCR技術(shù)等操作復(fù)雜，準(zhǔn)確性低，污染嚴(yán)重的缺點(diǎn)。
4 結(jié)語
綜上所述，F(xiàn)Q—PCR作為一種核酸定量技術(shù)，在以前的PCR技術(shù)上得到進(jìn)一步發(fā)展，大大降低了假陽性率，工作效率高，結(jié)果重現(xiàn)性好，且不必使用對人體有害的染色劑。FQ—PCR應(yīng)用較多且較成熟主要是在病原體檢測方面，其*性在此也得以充分體現(xiàn)。因此將其應(yīng)用于臨床具有很大潛力。在腫瘤、遺傳病研究，尤其
是基因表達(dá)方面的研究，該技術(shù)應(yīng)用還較少，在這方面加強(qiáng)研究應(yīng)用，將會有廣闊的前景。將生物基因芯片技術(shù)與FQ—PCR技術(shù)結(jié)合，有助于PCR技術(shù)的進(jìn)一步完善，推動該技術(shù)的發(fā)展、應(yīng)用。