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你知道細(xì)胞凍存液的配方嗎

時(shí)間:2023/1/9閱讀:4003
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假如要想做到那樣的目地,那么就需要體細(xì)胞冷凍液,這類東西如何配備呢?下邊就來實(shí)際的了解一下,細(xì)胞凍存液的秘方是啥?

24.jpg

細(xì)胞凍存液的配方是什么?

(一)細(xì)胞凍存

1. 配置含10%DMSO或凡士林、10~20%小牛血清的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液;

2. 取對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期的體細(xì)胞,除去舊細(xì)胞培養(yǎng)液,用PBS清理。

3. 除去PBS,添加適量蛋白酶(遮蓋細(xì)胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長(zhǎng)發(fā)育的體細(xì)胞消化吸收出來;

4. 抽濾1000rpm,5min;


5. 除去蛋白酶,添加適量配置好的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液,用塑料吸管輕輕地吹打使體細(xì)胞勻稱,記數(shù),調(diào)整凍存液中體細(xì)胞的后相對(duì)密度為5牙周106/ml~1牙周107/ml;

6. 將體細(xì)胞分裝進(jìn)凍存管中,每管1~1.5 ml;

7. 在凍存管上標(biāo)出體細(xì)胞的名字,凍存時(shí)間及作業(yè)者;

8. 凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序流程為減溫速度-1~-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃下列時(shí),可升至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可快速滲入液態(tài)氮中。也可將配有體細(xì)胞的凍存管放進(jìn)-20℃電冰箱2h,隨后放進(jìn)-70℃電冰箱中留宿,取下凍存管,移進(jìn)液氮容器內(nèi)。


(二) 細(xì)胞復(fù)蘇

1. 從液氮容器中取下凍存管,立即滲入37℃溫開水中,并時(shí)常搖晃令其盡早溶化。

2. 從37℃水浴中取下凍存管,開啟外蓋,用塑料吸管吸出來體細(xì)胞懸液,加到離心管并滴加10倍以上細(xì)胞培養(yǎng)液,攪拌;

3. 抽濾, 1000rpm,5min;

4. 棄去上清液,添加含10%小牛血清細(xì)胞培養(yǎng)液重懸體細(xì)胞,記數(shù),調(diào)節(jié)體細(xì)胞相對(duì)密度,打疫苗塑造瓶,37℃恒溫箱靜放塑造;

5. 隔日拆換一次細(xì)胞培養(yǎng)液,再次塑造。


常見問題

1.從繁衍期到產(chǎn)生高密度的單層細(xì)胞之前的塑造體細(xì)胞都能夠用以凍存,但/好是為多數(shù)成長(zhǎng)期體細(xì)胞。在凍存前一天*是換一次細(xì)胞培養(yǎng)液;

2.將凍存管放進(jìn)液氮容器或從這當(dāng)中取下時(shí),要搞好安全防護(hù)工作中,以防凍傷;

3.凍存和再生/好用新配置的細(xì)胞培養(yǎng)液。


以上是細(xì)胞凍存液的配方你知道嗎? 研域(上海)化學(xué)試劑有限公司總部設(shè)在上海,公司專業(yè)經(jīng)營(yíng)生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、實(shí)驗(yàn)室消耗品等,我們致力于向國(guó)內(nèi)外生命科學(xué)研究人員提供產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。

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