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高速逆流色譜儀常用的溶劑體系選擇
閱讀：2463發(fā)布時間：2020-7-22
1、分配系數(shù)測定法
一個穩(wěn)定的兩相溶劑體系是否適合于目標物質(zhì)的分離，通常要看物質(zhì)在該溶劑體系中的分配系數(shù)是否在一個合適的范圍內(nèi)。分配系數(shù)K=CS/CM或CU/CL。其中CS指溶質(zhì)在固定相中的濃度，CM指在流動相中的濃度，CU指溶質(zhì)在上相中的濃度，CL指溶質(zhì)在下相中的濃度。一般而言，對HSCCC合適的K值范圍是0.5~2。當(dāng)CS/CM≤0.5時，出峰時間太快，峰之間的分離度較差；當(dāng)CS/CM≥1時，出峰時間太長且峰形變寬。而當(dāng)0.5<CS/CM<2時，可以在合適的時間內(nèi)，得到分離度較好的峰形。
2、 薄層色譜法
采用薄層色譜（TLC）法也可選擇對HSCCC合適的兩相溶劑體系。在硅膠板上作薄層色譜試驗，用水飽和的有機層（即兩相中的有機相）作展開劑。如果需要分離的組分的Rf＞0.5（低級性溶質(zhì)），這說明此種條件適用于這些組分混合物的分離，而且弱極性的有機相適用于作流動相。對于極性較大的溶質(zhì)Rf＜0.5，則極性較強的那一相可作流動相。
3、PLC掃描法
對于一個未知樣品，可以通過HPLC掃描的方法，對樣品的復(fù)雜程度及其組分的極性程度有一個初步的了解。具體來講，可以將樣品注入一根15cm長的C18HPLC柱，以乙腈和水為流動相，以1ml/min流速，從100%乙腈梯度洗脫1h，觀察樣品出峰的位置。如果絕大部分峰的保留時間都小于15min，也就意味著這些組分是由含量小于25%的乙腈流動相洗脫出來的，在高速逆流色譜儀中可以采用極性溶劑體系，如正丁醇-水等；如果峰的保留時間是在15～50min之間，意味著這些物質(zhì)具有中等極性，在CCC中可以采用中等極性溶劑；如果絕大部分峰在50min后洗脫出來，也就是由大于80%的乙腈流動相洗脫出來的，那么在CCC分離中應(yīng)該采用弱極性的容積體系。
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