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濕熱滅菌的方法

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濕熱滅菌法是用飽和水蒸氣、沸水或通蒸汽行滅菌的方法,以溫壓水蒸氣為介質(zhì),由于蒸汽潛熱大,穿透力強,容易使蛋白質(zhì)變性或凝固,導(dǎo)致微生物的死亡,所以該法的滅菌效率比干熱滅菌法,是藥物制劑過程中常用的滅菌方法。

原理

濕熱滅菌的原理是使微生物的蛋白質(zhì)及核酸變形導(dǎo)致其死亡。這種變形是分子中的氫鍵分裂,當氫鍵斷裂時,蛋白質(zhì)及核酸內(nèi)結(jié)構(gòu)被破壞,而喪失了原有能。蛋白質(zhì)及核酸的這種變形可以是可逆的,也可以是不可逆的。雖然無所謂動能行結(jié)構(gòu)被破壞,若氫鍵破裂的數(shù)量未達到微生物死亡的臨界值,則其分子很可能恢復(fù)到它原有的形式,微生物就沒有被殺死。為有效地使蛋白質(zhì)變形,如采用壓蒸汽滅菌時,就需要水蒸氣有足夠的溫度和持續(xù)時間,這對滅菌效果十分重要。溫飽和水蒸氣可迅速使蛋白質(zhì)變形,在規(guī)定操作條件下,蛋白質(zhì)發(fā)生變形的過程即微生物死亡的過程,是可預(yù)見和重復(fù)的。微生物的滅活符合動力學方程,微生物死亡速率是微生物耐熱參數(shù)D和殺滅時間的函數(shù)。即在給定的時間下被滅活的微生物與仍然存活數(shù)成正比。

LgNt=lgNo-F(T,Z) /DT

Nt:t分鐘后微生物計數(shù)值;

No:初始微生物計數(shù)值;

DT:在T溫度下的微生物降低個對數(shù)單位所需要的時間,分鐘;

F(T,Z):滅菌程序在確定溫度系數(shù)Z的T溫度的等效滅菌時間。

濕熱滅菌的方法

影響濕熱滅菌的主要因素有:微生物的種類與數(shù)量、蒸汽的性質(zhì)、藥品性質(zhì)和滅菌時間等。

(1)通蒸氣滅菌法:是在常壓條件下,采用100攝氏度通蒸氣加熱殺滅微生物的方法,滅菌時間通常為30-60分鐘。該法適用于消毒以及不耐熱制劑的滅菌,但不能保證殺滅所有芽孢,是非可靠的滅菌方法。

(2)間歇蒸汽滅菌法:利用反復(fù)多次的通蒸汽加熱,殺滅所有微生物,包括芽胞。方法同通蒸汽滅菌法,但要重復(fù)3次以上,每次間歇是將要滅菌的物體放到37℃孵箱過夜,目的是使芽胞發(fā)育成繁殖體。若被滅菌物不耐100℃溫,可將溫度降至75℃~80℃,加熱延長為30~60分鐘,并增加次數(shù)。適用于不耐熱的含糖或牛奶的培養(yǎng)基。

(3)壓蒸汽滅菌法:103.4千帕蒸汽壓溫度達121.3℃,維持15-20分鐘。

濕熱滅菌法 濕熱法可在較低的溫度下達到與干熱法相同的滅菌效果,因為:①濕熱中蛋白吸收水份,更易凝固變性;②水分子的穿透力比空氣大,更易均勻傳遞熱能;③蒸汽有潛熱存在,每1克水由氣態(tài)變成液態(tài)可釋放出529卡熱能,可迅速提物體的溫度。

濕熱滅菌法般采用121℃,滅菌20-30min,如果是產(chǎn)孢子的微生物則應(yīng)采用滅菌后適宜溫度下培養(yǎng)幾小時,再滅菌次,以用于殺死剛剛萌發(fā)的孢子。

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