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葡聚糖凝膠的使用方法

閱讀:8083發(fā)布時間:2016-8-16

葡聚糖凝膠適用于天然產(chǎn)物在有機溶劑中的純化。例如:類固醇、萜類、脂類以及小分子多肽等,葡聚糖凝膠同時適用于分子類別非常相似的物質(zhì)的分離和工業(yè)規(guī)模的制備,既可用于初步純化步驟,也可以用于終精制步驟。

葡聚糖凝膠使用方法:

1. 乙醇浸泡:在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2. 無鹽水浸泡:室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹,然后;
3. 鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性;
4. 將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層;
5. 上樣前平衡層析柱少3-5 個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值);
6. 凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時上樣量可以達(dá)到20% 的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1 即可;
7. 洗脫方法:可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;
8. 在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以少三個柱體積平衡緩沖液再生。

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