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對掃描電鏡觀察的樣品該如何進行處理呢

時間:2020/6/11閱讀:4674
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  在進行掃描電鏡觀察前,要對樣品作相應的處理。掃描電鏡樣品制備的主要要求是:盡可能使樣品的表面結構保存好,沒有變形和污染,樣品干燥并且有良好導電性能。那么接下里就讓我們來看看對樣品該如何處理吧。
 
  一、樣品的初步處理
 
  (一) 取材
 
  掃描電鏡來說,樣品可以稍大些,面積可達8mm×8mm,厚度可達5mm。對于掃描電鏡易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等,可固定在濾紙或卡片紙上,以充分暴露待觀察的組織表面。
 
  (二) 樣品的清洗
 
  用掃描電鏡觀察的部位常常是樣品的表面,即組織的游離面。由于樣品取自活體組織,其表面常有血液、組織液或粘液附著,這會遮蓋樣品的表面結構,影響觀察。因此,在樣品固定之前,要將這些附著物清洗干凈。
 
  (三) 固定
 
  固定所用的試劑和透射電鏡樣品制備相同,常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大,固定時間應適當延長。也可用快速冷凍固定。
 
  (四) 脫水
 
  樣品經(jīng)漂洗后用逐級增高濃度的酒精或丙酮脫水,然后進入中間液,一般用醋酸異戊酯作中間液。
 
  二、樣品的干燥
 
  掃描電鏡觀察樣品要求在高真空中進行。無論是水或脫水溶液,在高真空中都會產(chǎn)生劇烈地汽化,不僅影響真空度、污染樣品,還會破壞樣品的微細結構。因此,樣品在用電鏡觀察之前必須進行干燥。干燥的方法有以下幾種:
 
  (一) 空氣干燥法
 
  空氣干燥法又稱自然干燥法,就是將經(jīng)過脫水的樣品,讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸揮發(fā)干燥。這種方法的優(yōu)點是簡便易行和節(jié)省時間;它的主要缺點是在干燥過程中,組織會由于脫水劑揮發(fā)時表面張力的作用而產(chǎn)生收縮變形。因此,該方法一般只適用于表面較為堅硬的樣品。
 
  (二)臨界點干燥法
 
  臨界點干燥法是利用物質(zhì)在臨界狀態(tài)時,其表面張力等于零的特性,使樣品的液體*汽化,并以氣體方式排掉,來達到*干燥的目的。這樣就可以避免表面張力的影響,較好地保存樣品的微細結構。此法操作較為方便,所用的時間也不算長,一般約2~3小時即可完成,所以是常用的干燥方法。
 
  (三) 冷凍干燥法
 
  冷凍干燥法是將經(jīng)過冷凍的樣品置于高真空中,通過升華除去樣品中的水分或脫水劑的過程。冷凍干燥的基礎是冰從樣品中升華,即水分從固態(tài)直接轉化為氣態(tài),不經(jīng)過中間的液態(tài),不存在氣相和液相之間的表面張力對樣品的作用,從而減輕在干燥過程中對樣品的損傷。

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