BM6019 淀粉磷酸化酶試劑盒 淀粉系列
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號(hào) BM6019
- 產(chǎn)地 北京
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/4/3 15:07:45
- 訪問(wèn)次數(shù) 66
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | BM6019 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 既可催化淀粉的合成,也可催化淀粉的分解 |
淀粉磷酸化酶（Starch phosphorylase，SP）試劑盒說(shuō)明書
分光光度法 50 管/48 樣
淀粉磷酸化酶試劑盒 淀粉系列
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase，SP）是淀粉代謝過(guò)程唯yi的可逆反應(yīng)酶，既可催化淀粉的合成，也可催化淀粉的分解。
在高等植物中，淀粉磷酸化酶（合成方向）主要存在于質(zhì)體中，負(fù)責(zé)延長(zhǎng)淀粉的 α-1,4-葡萄糖鏈的非還原末端；淀粉磷酸化酶（分解方向）主要存在于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中，催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵磷酸解產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸，負(fù)責(zé)葡萄糖鏈的磷酸解，是淀粉代謝過(guò)程中的關(guān)鍵酶。
在植物體中，淀粉磷酸化酶分解方向的底物無(wú)機(jī)磷濃度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸濃度幾乎高了兩個(gè)數(shù)量級(jí)，一般認(rèn)為淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解，因此，分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要測(cè)定意義。
測(cè)定原理：
淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵與無(wú)機(jī)磷反應(yīng)產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸，葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖變位酶的作用下產(chǎn)生葡萄糖-6-磷酸，并在 6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化下還原 NADP+產(chǎn)生NADPH，使 340nm 下吸光值增加。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BM6019-50T/48S | Storage |
提取液：液體 | 60ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1 支 | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 1 支 | 4℃ |
說(shuō)明書 | 一份 | |
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 3ml 水溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存；試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；臨用前加入 3ml 水溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存。
自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清待測(cè)。
2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零；
2、工作液的配制：臨用前將試劑一、試劑二、試劑三按照每個(gè)樣本 850μL:50μL:50μL 的比例混合，臨用前配制，半小時(shí)內(nèi)使用。
3、在 1ml 石英比色皿中加入 50μL 樣本和 950μL 工作液，立即混勻，記錄 340nm 處 1min 時(shí)的吸光值A(chǔ)1和 6min 時(shí)的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
SP 活力單位的計(jì)算：
按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmolNADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
SP（nmol/min/mgprot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr)÷T
=943×ΔA÷Cpr
按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g 組織每分鐘產(chǎn)生 1nmolNADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
SP（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T
=943×ΔA÷W
按樣本細(xì)胞計(jì)算
單位定義：每萬(wàn)個(gè)細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生 1nmolNADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
SP（nmol/min/104cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T
=1.886×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm； V 樣：加入樣本體積，0.05ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5min；Cpr：樣本蛋白質(zhì) 濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；細(xì)胞數(shù)量，500 萬(wàn)。
淀粉磷酸化酶試劑盒 淀粉系列
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