β-木糖苷酶（β- xylosidase）測定試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

β-木糖苷酶測定試劑盒 糖代謝

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關鍵酶，產(chǎn)物木糖可作為碳源應用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應用價值。

測定原理：

β-木糖苷酶催化對硝基苯fen-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基苯fen，對硝基苯fen在 405nm 處有特征吸收峰，測定405nm 光吸收增加速率，可計算β-木糖苷酶活性。

組成：

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 20min，取上清待測。

細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

液體：直接檢測。

測定操作表：

1、分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節(jié)波長至 405nm。

2、操作表

β-木糖苷酶活性計算公式：

用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x 為標準品濃度（μmol/ml），y 為吸光值ΔA。

1、按蛋白濃度計算

酶活定義：45℃，pH7.4 時每毫克蛋白 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對硝基苯fen為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T×1000

= 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr

2、按樣本質量計算：

酶活定義：45℃，pH7.4 時每克樣品 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對硝基苯fen為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鮮重）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W

3. 按細胞數(shù)量計算：

酶活定義：45℃，pH7.4 時每 104 個細胞 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對硝基苯fen為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細胞數(shù)量（萬個）

÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞數(shù)量（萬個）

（4）按液體體積計算

酶活定義：45℃，pH7.4 時每毫升液體 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對硝基苯fen為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ ml）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷V 樣÷T×1000

=11.34×(ΔA-0.0011)

V 樣總：加入提取液體積，1ml； V 反總：反應總體積，0.12ml；V 樣：反應中樣品體積，0.04ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣品質量，g；T：反應時間，20min；1000:1μmol/L=1000nmol/L

用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y=6.613x+0.0011，R2=0.9998；x 為標準品濃度（μmol/ml），y 為吸光值ΔA

1、按蛋白濃度計算

酶活定義：45℃，pH7.4 時每毫克蛋白 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對硝基苯fen為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T×1000

= 22.68×(ΔA -0.0011)÷ Cpr

2、按樣本質量計算：

酶活定義：45℃，pH7.4 時每克樣品 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對硝基苯fen為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鮮重）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T×1000= 22.68×(ΔA-0.0011)÷W

3. 按細胞數(shù)量計算：

酶活定義：45℃，pH7.4 時每 104 個細胞 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對硝基苯fen為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細胞數(shù)量（萬個）

÷T×1000=22.68×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞數(shù)量（萬個）

（4）按液體體積計算

酶活定義：45℃，pH7.4 時每毫升液體 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1 nmol 對硝基苯fen為一個酶活單位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ ml）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反總÷V 樣÷T×1000

=22.68×(ΔA-0.0011)

V 樣總：加入提取液體積，1ml； V 反總：反應總體積，0.12ml；V 樣：反應中樣品體積，0.04ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣品質量，g；T：反應時間，20min；1000:1μmol/ml=1000nmol/ml

ΔA 控制在 0.01-1 范圍內(nèi)，若ΔA 大于 1，可適當減小樣本量。標準曲線線性范圍為：0.01μmol/ml-0.5μmol/ml。

β-木糖苷酶測定試劑盒 糖代謝