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島津應(yīng)用：nSMOL前處理技術(shù)結(jié)合Skyline軟件
LCMS 技術(shù)分析蛋白藥物或者蛋白標(biāo)記物，通常需要經(jīng)過胰酶酶解過程，獲得的酶解混合物經(jīng)過凈化后再分析。復(fù)雜生物基質(zhì)例如血漿、血清中目標(biāo)抗體藥物若采用傳統(tǒng)酶解方式或 Pellet 酶解方式，獲得的酶解產(chǎn)物均為多種肽段的混合物。結(jié)合 LCMS 分析的特點，在方法開發(fā)的過程中需要針對酶解的備選肽段進行 MRM 通道的篩選和優(yōu)化，酶解產(chǎn)物越復(fù)雜在方法開發(fā)過程中所消耗的時間越長。隨著技術(shù)的發(fā)展，我們發(fā)現(xiàn)通過納米表面限制性和導(dǎo)向性酶解抗體藥物實現(xiàn) Fab 區(qū)域的選擇性酶解技術(shù)（nSMOL）處理抗體，可以盡可能降低對非特異性區(qū)域例如保守區(qū)域的酶解，從而極大地減少了酶解肽段的數(shù)量，進一步的 LCMS 方法開發(fā)過程大為簡化。
與傳統(tǒng)的基于經(jīng)驗篩選蛋白特征肽段的過程不同，島津公司將其超快速液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用平臺和強大的 Skyline 定量蛋白質(zhì)組學(xué)軟件集成一體。Skyline 軟件為蛋白質(zhì)定量的研究工作提供了標(biāo)準(zhǔn)化的工作流程，使得方法開發(fā)工作不再過度依賴研究人員的經(jīng)驗，降低了肽段篩選和 MRM 通道分析條件優(yōu)化的復(fù)雜程度。
本文利用nSMOL前處理試劑包結(jié)合Skyline軟件，加速抗體藥物LCMS方法開發(fā)過程，僅在一個工作日就可以完成單個抗體藥物的 LC-MS/MS 方法的初步優(yōu)化。在本實驗中篩選階段，貝伐珠單抗共有 9 個肽段具有典型色譜峰，其中 4 條肽段與貝伐珠單抗的 Fab 區(qū)域相關(guān)，而貝伐珠單抗具有代表性的特異性肽段集中于 Fab 區(qū)域，4 條 Fab 區(qū)域的肽段響應(yīng)遠高于其他肽段；曲妥珠單抗共有 10 個肽段典型色譜峰，其中 8 條肽段與貝伐珠單抗的 Fab 區(qū)域相關(guān)，80%的肽段與抗體 Fab 區(qū)域相關(guān)。與傳統(tǒng)的 ELISA 方法需要制備特異性免疫試劑進行檢測消耗的時間比，本方法極大地縮短了方法開發(fā)的過程，更靈活快速應(yīng)對抗體藥物和生物類似藥臨床前及臨床研究等不同階段生物分析的需求。
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