動(dòng)物選擇

一般選擇4-6周齡Nude裸鼠,需要提前到SPF環(huán)境中適應(yīng)1周。

接種部位與接種細(xì)胞量

接種部位常為皮下,靜脈或原位;細(xì)胞量一般是5*106個(gè)/200ul,但是不同的細(xì)胞系的接種量略有差別。

成瘤時(shí)間

皮下接種的細(xì)胞一般會(huì)在1-2周成瘤,一般不會(huì)超過(guò)1個(gè)月;尾靜脈和腹腔接種的細(xì)胞一般也是1周左右,需要密切觀察動(dòng)物的體重與狀態(tài)進(jìn)行判斷。

為什么腫瘤不長(zhǎng)?

如果細(xì)胞接種后超過(guò)預(yù)期的觀察時(shí)間仍未成瘤,需要從以下方面進(jìn)行排查原因:

一是細(xì)胞活力,細(xì)胞活力是影響腫瘤形成的重要原因,活力不夠不能成瘤,因此細(xì)胞消化下來(lái)PBS清洗后要盡快接種;

二是動(dòng)物選擇,選擇的裸鼠周齡不宜過(guò)大,否則也會(huì)增大成瘤難度(如果還未成瘤建議更換缺陷程度更高的Nod-scid小鼠,NOG小鼠);

三是飼養(yǎng)環(huán)境,環(huán)境影響動(dòng)物狀態(tài),狀態(tài)差的鼠容易發(fā)生死亡,不易成瘤。

為什么瘤子長(zhǎng)起來(lái)又消失?

很可能開(kāi)始我們觀察到的腫瘤是炎癥反應(yīng),到后來(lái)腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收,需要繼續(xù)觀察腫瘤細(xì)胞吸收之后是否還能長(zhǎng)出來(lái),長(zhǎng)不出來(lái)建議分析上述原因重新實(shí)驗(yàn)。

需要觀察什么?

在腫瘤長(zhǎng)出后，需要密切觀察動(dòng)物的狀態(tài)，體重和瘤體積。瘤體積的測(cè)量一般采用公式V=ab2/2進(jìn)行計(jì)算。動(dòng)物體重的增加活著減少量，直接反應(yīng)著動(dòng)物的整體狀態(tài)，評(píng)估腫瘤是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移等。

如何判斷腫瘤是否出現(xiàn)了轉(zhuǎn)移?

病理剖檢。如果腫瘤出現(xiàn)了轉(zhuǎn)移,在肝臟或者腎臟等組織上肉眼可見(jiàn)明顯轉(zhuǎn)移灶。

第二:小動(dòng)物活體成像。如果接種的腫瘤細(xì)胞帶有熒光標(biāo)簽或者熒光素酶,可以借助小動(dòng)物活體成像儀進(jìn)行觀察瘤細(xì)胞的大小和轉(zhuǎn)移情況。

第三:小動(dòng)物核磁。小動(dòng)物核磁技術(shù)可以更明細(xì)那地觀察到腫瘤細(xì)胞在肝臟,肺臟或者其他器官的轉(zhuǎn)移情況

哪些細(xì)胞能夠成瘤?

目前驗(yàn)證過(guò)的細(xì)胞有HCT116、HePG2、A549、MKN45、AGS、 CT26 、NCI-H460、HT-29、SK-OV-3、MCF-7、B16、SGC7901、BEL-7402、BGC-823、PC-12等(待更新)。