DIGE技術(shù)實驗服務(wù)

實驗技術(shù)簡介:

DIGE一雙向熒光差異凝膠電泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis ,2D-DIGE)，是在傳統(tǒng)雙向電泳的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的新型蛋白質(zhì)組學定量技術(shù)，其分離蛋白質(zhì)混合的原理與雙向電泳是一致的， 主要利用蛋白質(zhì)的等電點和分子量的差異來分離蛋白質(zhì)混合物，同時應(yīng)用熒光染料的靈敏度及內(nèi)標的使用等技術(shù)，使其在定量蛋白質(zhì)組學的研究中效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)雙向電泳。DIGE使用的熒光染料有Cy2, Cy3和Cy5,它們能與蛋白質(zhì)的賴氨酸側(cè)鏈氨基反應(yīng)而使蛋白質(zhì)被標記，被標記蛋白質(zhì)的等電點和分子量幾乎不受影響，等量混合標記好的蛋白質(zhì)后進行雙向電泳，不同凝膠之間可以

通過cy2內(nèi)標匹配，消除凝膠之間的差異，蛋白質(zhì)表達量的變化則通過cy3和cy5不同熒光的強度來體現(xiàn)。

與常規(guī)雙向電泳后，銀染或考染膠相比，DIGE具有以下優(yōu)勢:

1、靈敏度高，Z低可檢測到125pg的蛋白質(zhì);

2、高效性，同一塊凝膠上可以電泳兩個樣品，減輕了工作量;

3、線性范圍更廣，動態(tài)范圍高達10-5;

4、定量精確,采用內(nèi)標消除了凝膠與凝膠之間的實驗誤差，顯著提高了實驗的精確度和可重復(fù)性;

5、統(tǒng)計學分析，ImageMaster7.0 (DIGE) 軟件可以得到統(tǒng)計學可信的結(jié)果，降低了操作者之間的偏差。

DIGE技術(shù)服務(wù)流程

DIGE技術(shù)服務(wù)內(nèi)容

1、樣本制備與定量; .

2、熒光標記;

3、雙向電泳和圖片分析;

4、DIGE實驗報告提交。

送樣須知:

1、技術(shù)咨詢:在您開展實驗之前，本公司將為您竭誠提供有效的DIGE實驗設(shè)計方案。

2、為了保證DIGE實驗?zāi)茼樌M行，樣品須液氮或干冰保存寄送，

注:樣本應(yīng)避免各類污染和反復(fù)凍融。

實驗報告內(nèi):

1、DIGE熒光電子圖片;

2、蛋白質(zhì)點定量分析結(jié)果，包括差異點號碼、差異倍數(shù)、pI和MW等;

3、完整實驗報告，包括實驗步驟、使用儀器、軟件檢索參數(shù)等。